1 适用范围

　　本标准适用于尿素酶法测定尿素或仅含有氮的肥料中尿素态氮含量。该法也适用于相应的工业产品。

2 原理

　　在一定酸度的溶液中，用尿素酶将尿素态氮转化为氨，再用硫酸标准溶液滴定。反应式如下：

3 试剂和溶液

　3.1 溴甲酚绿(HG 3—1220—79)：0.1％乙醇溶液。

　3.2 甲基橙(HGB 3089—59)：0.1％溶液。

　3.3 95％乙醇(GB 679—80)。

　3.4 混合指示剂溶液：6份0.1％溴甲酚绿溶液(3.1)和1份0.1％甲基橙溶液 (3.2)混合。

　3.5 硫酸(GB 625—77)。

　3.6 0.5N硫酸标准溶液：按照GB 601—77《化学试剂标准溶液制备方法》配制和标定。

　3.7 尿素酶：新鲜的1％溶液(悬浮液)。

4 仪器

　4.1 pH计。

　4.2 水浴。

5 测定手续

　5.1 试液制备

　　称取5克试样，称准至0.0002克，置于烧杯中，加水溶解后，移入500毫升容量瓶中，稀释至刻度，混匀。

　5.2 滴定

　　吸取V毫升(含相当0.20～0.25克尿素)的试液，移入烧杯中，稀释至100毫升，用0.5N硫酸标准溶液(3.6)滴定至pH为4.2〔用pH计(4.1)测量〕；或加入4滴混合指示剂溶液(3.4)，用0.5N硫酸标准溶液(3.6)滴定至溶液呈灰绿色(pH为4.2)为终点，记录所需用量。

　　另吸取V毫升试液，移入250毫升带磨口塞的锥形瓶中，稀释至100毫升，加入和上述滴定所需体积的0.5N硫酸标准溶液(3.6)，再加入25毫升1％尿素酶溶液(3.7)，塞紧瓶塞，用力振荡2分钟，在25±2℃下静置〔1小时或在40±2℃水浴(4.2)下静置30分钟，冷却至室温〕，用水冲洗瓶塞和瓶壁，然后用0.5N硫酸标准溶液(3.6)滴定，开始时快速加入15毫升，再继续滴定至近pH4.2，将溶液定量地移入烧杯中（溶液总体积不大于200毫升），在pH 计（4.1）上，再滴定至pH4.2为终点；或在快速加入15毫升0.5N硫酸标准溶液（3.6）后，再加入4滴混合指示剂溶液（3.4），继续滴定至溶液呈灰绿色（pH为4.2）为终点。

　5.3 空白试验

　　按上述手续进行空白试验。

6 结果的表示

　6.1 计算

　6.1.1 尿素态氮含量百分数(以干基计)按下式计算：

　6.2 允许误差

　6.2.1 取平行测定结果的算术平均值为测定结果。

　6.2.2 平行测定结果的绝对差值不大于0.10％。

　6.2.3 不同实验室测定结果的绝对差值不大于0.15％。

附　录　A

本标准一般说明

(补充件)

　A.1 标准中使用的计量仪器，如天平、砝码、容量瓶、滴定管、移液管等应校正后使用。

　A.2 标准中使用的水，除特别说明外，均用蒸馏水或去离子水。

　A.3 标准中使用的试剂，除特别注明外，均为化学纯以上试剂。

　A.4 标准中所用酸或氨水液体试剂，只写试剂名称时，系指该试剂标准规定浓度的试剂(即浓酸或浓氨水)。例如硫酸系指95～98％硫酸，氨水系指25～28％氨水。

　A.5 标准中用液体试剂配制的水溶液，以试剂的体积加水的体积表示时，例如1+3硫酸，系指1体积硫酸和3体积水配成。

　A.6 标准中用固体试剂配制的百分浓度溶液，系指100毫升溶液中含有溶质的克数。

　A.7 标准中测定手续项中所提及的仪器或试剂和溶液，均使用仪器或试剂和溶液项中所规定的规格。

　A.8 空白试验，除不加试样外，操作手续、应用试剂和试剂用量均与测定时相同。