 |
   |
高效液相色谱法（HPLC）
苯酚（C6H5OH）分子量94.ll，是简单的一元酚。无色、易挥发、具有恶臭味、沸点182℃，能溶于水，并能以任何比例与醇相溶。
氢醌[C6H4（OH）2]分子量l10.10，二元酚，为白色晶体。沸点286.2℃，能溶于水，并能以任何比例与醇相溶。
氢醌、苯酚二者均具有一定毒性，人体接触过多易引起白血病和心脏病。氢醌、苯酚在祛斑类化妆品中为彬物质，但可在染发用的氧化着色剂及香波产品中限量使用。我国化妆品卫生标准规定其限用量分别为：染发剂中氢醌2%；洗发香波中酚1%。
氢醌、苯酚可用氯牙色谱和比色法分别进行测定。本法采用高效液相色谱，一次进样同时测定二个化合物。本方法简单，分离效果好，灵敏度也较高（1）。
1 应用范围
本法适用于测定祛斑类、洗岑类及染发用氧化着色剂中的氢醌、苯酚。
苯酚最低检测量为0.03µg，氢酿最低检测量为0.06?g。
2 原理
3 试剂
3.l 甲醇优级纯
3.2氢醇标准溶液：准确称取0.100Og氢醌置于烧杯中，用少量甲醇（3.1）溶解后移至100ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。此标准溶液浓度为1.00mg/ml，可稳定一个月。
3.3苯酚标准溶液：准确称取0.1000g苯酚置于烧杯中，用少量甲醇（3.1），溶解后移至100ml溶量瓶中，用甲醇稀释至刻度。此标准溶液浓度为1.00mg/m1，可稳定一个月。
3.4 氢醌、苯酚混合标准溶液：分别取20.0ml氢醌标准溶液(3.2)、50.0ml苯酚标准溶液(3.3)置于100ml容量瓶中,加甲醇至刻度,此溶液1.0ml分别含氢醌、苯酚0.20mg、0.20mg。
4 仪器
4.1高效液相色谱仪。
4.2振荡器。
4.3超声波清洗机。
5 分析步聚
5.1样品预处理
称取检测样品1～2g于三角瓶中，在水浴上馏除有机溶剂，用甲醇稀释至20ml振荡10min(2),超声15min，取上清液过0.45µm滤膜后备用。
5.2 色谱条件
色谱柱：C18柱。
流动相：甲醇+水=（60＋40）。(4)
流速；1.0ml／min。
柱温：室温。
检测器：紫外检测器，彼长254nm。
5.3测定
5.3.1 定性
按仪器说明书调节仪器到最佳状态，取（5.l）的备用液进样5µl，以保留时间定性。
5.3.2 定量
5.3.2.1 标准曲线(5)
用（3.4）溶液配成含氢醌、苯酚为0、10.0、50.0、100.0、200.0µg／ml的混合标准溶液。依次从混合标准溶液中取5.0µ1注入高效液相色谱仪，记录各次色谱峰面积，并绘制峰面积一氢醌、苯酚含量（µg）曲线。
5.3.2 取5.1制备的样液5.0µl，注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，并从标准曲线上查出对应的氢醌、苯酚浓度。
6 计算
按下式计算氢醌、苯酚浓度：
氢酿或苯酚（％）一（A／m）×20×l/l0000
式中：A一一从曲线上查出测试样品中氢醌或苯酚的含量，µg；
m一一称样质量，g。
7 本方法准确度和精密度
氢醌的加标回收率为83.01％～105.O％；苯酚的加标回收率为99.32％～108.8％。氢醌的相对标准偏差为2％；苯酚的相对标准偏差为3％。
注解：
（1）氢醌、苯酚在化妆品中用HPLC进行测定，以保留时间定性，以标准品峰高进行定量。由于氢醌、苯酚在Rp＋HPLC上能得到良好的分离，而且测定时间又短（5min可全部测完），定量准确，所以是首选方法。
（2）在处理膏状样品时，加入甲醇提取后，振荡时间要充分，振荡时间不要少于10min，
以确保氢醌，苯酚能够充分提取出来。
（3）本方法所用HPLC具体条件是：SP88l0等容泵，柱子SPODS5?m，柱温为室温，柱压3700±20％Psi，流速1.O±0.1m1／min，衰减为16，低速1.0cm/min。
（4）本方法推荐流动相配比甲醇+水=60+40，可根据工作中的实际情况适当调整，出峰时间会有一些变化，但不会影响测定及定量结果。
（5）在制作工作曲线时，氢醌、苯酚在0.0005％～0.05％都有很好的线性关系，如样品中氢酿、苯酚浓度出了线性范围，可将样品稀释后测定。
中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所 信息室
|
化验室网站 |