| 氨基酸分析仪检定规程 |
| JJG 019--1996 |
1 前言
本规程参照国际法法制计量组织（OIML）技术工作导则第二部分：OIML国际建议和国际文件起草与表述规则、JJG1002-84国家计量检定规程编写规则和GB3100-93国际单位制及其应用编写的。
2 范围
本规程规定了氨基酸分析仪（以下称仪器）的检定方法。规程中所列检定方法适用于利用柱前衍生C18柱分离氨基酸，带自动恒温水解装置的高效仪器。仪器适合于分析含氨基酸的样品，可对水解氨基酸及游离氨基酸进行定性、定量分析。广泛用于生化、医药、食品、化工及农业等领域。
2．1 原理
本仪器氨基酸分析法是通过柱前衍生及反相色谱过程分离测定样品中氨基酸组成的一种方法。该法采用异硫氰酸苯酯（PITC）作衍生试剂，与氨基酸进行定量衍生反应，生成苯苯基硫代氨甲酰--氨基酸（PTC-AA）衍生物。混和氨基酸衍生物在色谱柱中随着流动相作相对移动时，在两相间进行反复多次地分配，因分配系数不同，使各组分达到分离。通过紫外检测器检定，然后与标准混和氨基酸谱图对照，根据保留时间进行定性分析，再通过标准校正曲线进行定量分析。
2．2 构成
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| 图1 仪器的结构框图 |
3 计量单位
本规程所用的单位见GB3100-93量和单位
4 计量要求
4．1 技术指标
新安装、使用中和修理后的检定应符合本规程表1规定的技术指标。
表1 氨基酸分析仪技术指标
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检定项目 |
技术指标 |
| 1 |
泵流量精度 |
1ml/min cu≤0.1%
5ml/min cu≤0.5%
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| 2 |
紫外检测器 基线噪声
基线漂移 |
≤3×10-4AUFS/h
≤5×10-3AUFS/h |
| 3 |
最小检测浓度 |
＜1×10-9mol |
| 4 |
柱效检查 |
n≥7000 |
| 5 |
重复性检查 |
保留时间 cu≤2%
峰面积 cu≤10% |
| 6 |
校正曲线线性检查 |
r＞0.99 |
5 技术要求
5．1外观要求
仪器应有下列标志，仪器名称、型号、制造厂名、出厂编号与日期。并附有出厂合格证、使用说明书。
5．2 安装条件
5．2．1 机房应避免腐蚀性气体及灰尘，无易燃易爆气体，室内排风良好。
5．2．2 仪器应安放大在平稳的工作台上，工作台不受阳光直射，周围无强烈的机械振动和电磁干扰。
5．3 检定环境
5．3．1电源电压（220V±20V）；频率：（50
Hz±0.5 Hz）。
5．3．2 室温(10℃~30℃)。
5．3．3 环境相对湿度：≤80%。
5．3．4 专用接地线。
5．3．5 超纯水 电阻值＞17MΩ。
5．4 检定设备
5．4．1 仪器主机、输液泵、色谱柱温度控制器、检测器、色谱工作站，附件无外观损伤；所有紧固件紧固良好；仪器组合系统中所有电源插头、管路，均按规定正确连接。
5．4．2 外围设备中应配置：水解样品工作台、冷井、真空泵、纯氮气瓶、液氮罐、超纯水装置、电冰箱、涡旋搅拌器、真空过滤器。
5．4．3 秒表分度值小于0.1s。
5．4．4 分析天平感量0.0001g
5．4．5 容量瓶
5．4．6 注射器，10ml两支，10μl、50μl、100μl各两支。
5．4．7 标准物质，本规程使用美国PIERCE生产的水解氨基酸和游离氨基酸标准液。
5.5 检定项目和检定方法
5．5．1 泵流量精度检定
在不连接柱的条件下，用超纯水作为流动相，起动泵，待流速稳定后，分别测定1.0ml/min;5.0ml/min时的流量（10次以上），计算cu（按公式3计算），或固定时间称重容量瓶计算。
5．5．2 紫外检测器检定
将检测器与记录仪连接好，以60%乙腈水溶液为流动相，设定流速0.5ml/min纸速10mm/min,灵敏度0.001AUFS,输出10mVFS,检测器波长为254nm,开机记录基线，待稳定后正式记录基线30min,测量并计算基线漂移和噪音。
5．5．3 柱效测定
样品 苊（0.46mg/ml乙腈溶液）
流动相 60%乙腈
流速 1.0ml/min
进样体积 8μl
紫外检测 254nm/0.2 AUFS
温度 室温
柱效 柱效n=25 (纸速×保留时间÷4.4%峰高处的峰宽)
2
5．5．4 重复性检查
取仪器随机配备的标准氨基酸，用微量注射器抽取适当量的标准溶液样品，配成一定量的溶液，衍生化后进行重复性测试（n＞10），将测试数据按以下公式计算。
 ...................（1）
 ........... ............（2）
 ...............................（3）
 ------n次进样的峰面积（或保留时间）的算术平均值
xi------第i次进样的峰面积或保留时间
n-------测定次数
s-------标准偏差
 ---相对标准偏差（也叫变异系数）
5．5．5 最小检测量的检定
在仪器正常工作状态下，用注射器注入1×10-9mol衍生反应好的氨基酸混合标样，记录样品峰，各种氨基酸的峰高应大于或等于两倍基线噪音按（4）计算最小检测量。
 ...........................(4)
Mmin--最小检测量
Mi--进样量
2Rn--2倍噪音
h--色谱峰高
5．5．6 校正曲线线性检查
用氯基酸标样配制浓度分别为0.2×10-9,0.4×10-9,0.6×10-9,0.8×10-9,1×10-9mol/μl的标准液，分别上机测试，进样量5μl。以浓度为横坐标，响应值为纵坐标作校正曲线，数据输入色谱工作站计算相关系数r。
6 计量管理
6．1 检定结果处理
经检定后的仪器，发给检定证书。在检定结论中需明确说明被检定的仪器应属于何种级别、是否合格、存在的问题和建议等。
6． 1. 1 检定中仪器发生故障，不能调试到正常状态时，必须停止使用，待维修好后再进行检定。
6．1．2 按本规程逐项进行检定，检定结果符合规定的技术指标发给检定合格证书，不合格则发给检定结果通知书。
6．1．3 检定项目中如果有一项达不到规定，应停机检修，直到所有项目均达到规定需要才能认为合格。
6．2 检定周期
6．2．1 校正曲线线性检查，每次实验均需校验。
6．2．2 柱效测定应根据具体使用情况，定期测定，一般以进样500次后作柱效测定以保证柱效n＞7000。
6．2．3 其它各个项目，暂定2年。如果仪器发生故障更换关键性配件后，必须进行校验合格后才能使用。 |
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