1 应用范围

本方法适用于化妆品中雌激素的测定。

2 原理

雌二醇和雌酮在一定温度下与对苯二酚生成橙色化合物，其颜色强度与雌二醇和雌酮浓度相关，经过比色测定，求出化妆品中雌激素的含量。

3试剂

3.1 呈色液：经碘饱和的石油醚（Petroleum ether）溶液。

3.2 标准品：雌二醇（Estradiol l7?）标准品、雌酮（Esttone）标准品，溶于乙醇中备用。

3.3 对苯二酚（又称氢酿， Hydroquinone，C₆H₄（OH）₂溶液：称取2g对苯二酚溶于100m1 65％（V/V）硫酸中，遮光贮存。

4 仪器

4.1 层析用滤纸：2×40cm。

4.2 分光光度计。

5 分析步骤

5.1 氧化铝（Alumina）滤纸的制备：滤纸2×40cm浸入经加温至60℃的20％硫酸铝铵［AlNH₄(S0₄)₂·12H₂O）溶液中30s，再置于贮有28％氨水、内部经氨饱和的密闭容器内，放置1h取出，置流水中洗涤6h，于约20℃干燥一夜备用。

5.2 样品预处理

称取1g样品置烧杯中，加10ml氯仿煮沸，加少量乙醇溶解杯壁上的水滴，冷却过滤，用10ml氯仿洗涤烧杯及滤纸，合并滤液和洗液，于水浴上馏去氯仿，加10～20m1异辛烷（Isooctane）溶解黄色油状之残留物，用70％（V/V）乙醇每次10ml，萃取4次。萃取液加5ml异辛烷振摇，分取乙醇层，浓缩至约10ml，加20ml水继续浓缩，再反复一次，馏去乙醉，得浓缩液约10～15ml。

确定此水溶液呈酸性（必要时加盐酸使呈酸性）后，每次以10ml苯，萃取4次。萃取液加5ml水摇混后，分取苯萃取液，馏去苯，残留物溶于乙醇，作待测溶液。

5.3 测定

5.3.1 定性

取样品溶液一部分，必要时浓缩之，以相当于雌酮2～10?g之量点样于氧化铝（A1umi-na）滤纸距一端5cm处。另以雌酮及雌二醇标准品2～10?g点样于同一氧化铝滤纸上作为对照。将氧化铝滤纸用10％氢氧化钠和苯按上升法于20℃展开约5h。风干后，用经碘饱和之石油醚溶液喷雾，如有雌酮或雌二醇存在，则在与对照试验相当之位置显现斑点。试验中R

5.3.2定量

经定性试验确定，仅含雌酮或雌二醇二者之一时，可以用此法测定其含量。

取样品溶液及雌酮标准溶液或雌二醇标准溶液分别置试管中，馏去乙醇，每试管各加对苯二酚（古伯溶液）溶液2ml，于100℃加热。30min后，水冷却，各加0.5m1水摇混，再于100℃加热5min后，水冷却，于波长515nm、测定其吸光度，计算样品中雌酮或雌二醇之含量。

6 计算

样品雌酮或雌二醇含量（µg）=S×A_t/A_s。

式中：
A_t----样品的吸光度；

A_s--一雌酮或雌二醇标准品的吸光度；

S--一比色所用标准品的量。