1 应用范围

本方法适用于膏霜类、乳液类、发用类化妆品中的雌二醇，乙炔雌二醇的测定。

2 原理

化妆品中的卵泡激素用有机溶剂提取，高效液相色谱测定，以保留时间定性，标准品峰高定量。

3 试剂

3.1 卵泡激素标准贮备液：准确称取雌二醇和乙炔雌二醇各100mg，加入氯仿溶解，转移至100ml容量瓶中并定容至刻度。此溶液1.00ml含上述激素各1.00mg。

3.2 卵泡激素标准溶液：移取3.1溶液5.00ml置于50ml容量瓶中，用氯仿稀释至刻度，此溶液1.00ml含上述激素各100.0?g。

3.3 己烷：优级纯。

3.4 四氢呋喃：优级纯。

3.5 二氯甲烷：优级纯。

3.6乙腈：优级纯。

4 仪器

4.1高压液相色谱仪，具荧光检测器。

4.2分液漏斗：100ml。

4.3旋转浓缩器。

5分析步骤

5.1样品预处理

5.1.1 液体样品（化妆水、生发水等）；准确称取样品约2～10g^（1），用旋转蒸发器于约50℃水浴上蒸去溶媒。残留物加氯仿溶解^（2），定容至10.Oml，作为待测样品溶液^{（3）（4）}。

5.1.2 乳化样品（雪花膏、乳液等）：准确称取2～10g^（1）样品，加饱和氯化钠溶液100ml混匀，移入分液漏斗^（5），加2ml l0％硫酸、50ml二氯甲烷，振摇5min静置，分取二氯甲烷层。水层再用二氯甲烷提取二次，每次40ml，合并全部二氯甲烷提取液，用100m1水洗涤后，用无水硫酸钠脱水，旋转蒸发器蒸去二氯甲烷，控制水浴温度50℃。残渣加50ml乙腈溶解，转人分液漏斗，加50ml己烷，振摇5min，静置、分取乙腈层。己烷层加乙腈提取两次，每次30ml，合并全部乙腈提取液，用旋转蒸发器蒸去乙腈，控制水浴温度50℃，残渣用氯仿溶解^（2），定容至10.0ml作为样品溶液^{（3）（4）}。

5.2 色谱条件

5.2.1 色谱柱：硅胶柱Zorbax Sil，4.6mm（id）×250mm^（6）。

流动相：己烷+四氢呋喃（80+20）^（7）。

检测器：荧光检测器，激发波长280nm，发射波长307nm。

流速：1.5m1／min。

5.2.2色谱柱：同5.2.1。

流动相：己烷+乙醇（80+20）^（8）。

流速：1.5m1／min

检测器：同5.2.1。

5.3 定性测定

分别移取5?l各种激素标准溶液（3.2）和样品溶液，用氯仿^（2）二倍稀释，注入色谱仪，求出各自的保留时间，进行比较以定性。

5.4 定量

5.4.1 标准曲线

将3.2的各种标准溶液用氯仿^（2）稀释为每毫升含1.0、2.0、4.0、6.0、8.0和10.0?g的标准系列，各取10?l注入色谱仪,由所得的峰高（或峰面积）和浓度制做标准曲线。

5.4.2 测定

移取10?l样品溶液注入色谱仪，记录峰高（或峰面积），从标准曲线上查得样品溶液中雌二醇和乙炔雌二醇的浓度。

6 计算

各卵泡激素浓度(µg/g)=A×V/m

式中：
A----从标准曲线上查得的各卵泡激素的含量，?g/ml；

V----样品定容体积，m1；

m----样品质量；g。

注解：

（1）称取样品的量应含雌二醇和乙炔雌二醇的20～100µg。

（2）如使用色谱条件5.2.2，则用己烷替代氯仿。

（3）如样液含有不溶物，用聚四氟乙烯膜滤器（0.5µm）过滤。

（4）如样品中仍有干扰成分，可按下述步骤用C18微型柱净化：将按5.1.1和5.1.2萃取浓缩、稀释的样品液，用旋转浓缩器蒸去溶剂。残渣用5ml己烷+乙酸乙酯（95＋5）溶解，必要时加热至40℃助溶，冷至室温后，过微型柱用5ml己烷+乙酸乙酯（95+5）洗容器,注入微型拄，流尽后，加10ml已烷+乙酸乙酯（50+50）淋洗，再加5m1洗一次，收集己烷+乙酸乙酯（50+50）的流出液为样品溶液。

(5）饱合氯化钠溶液l00ml应分数次使用，以便将样品全部转移至分液漏斗。必要时，可用约20ml二氯甲烷冲洗容器后再移入分液漏斗。

(6)本文所用的柱是氨丙基硅胶键合色谱柱,峰形尖锐,雌二醇和乙炔雌二醇分离良好,羟基苯甲酸甲、乙、丙和丁酯均不产生干扰。

（7）流动相已烷+四氢呋喃的比例可以在（85+15）～（80+20）变动。如分离时有拖尾现象，可以加入0.1%醋酸以改善拖尾现象。

（8）流动相中乙醇含量影响分离效果，可根据试验的分离情况，改变已烷+乙醇的比例为（90+10）～（80+20）。