我国化妆品卫生标准规定可的松、氢化可的松、醋酸可的松、泼尼松、强的松等属于禁用物质。

1 适用范围

本法适用于化妆品中可的松、氢化可的松、醋酸可的松、醋酸氢化可的松、泼尼松、强的松的测定。

2 原理

化妆品中的肾上腺皮质激素用有机溶剂提取后，高效液相色谱测定。以保留时间定性，峰高定量。

3 试刑

3.1 可的松标准溶液；准确称取可的松（Merck公司制， Cortisone，C₂₁H₂₈O₅，360.46）10.0mg,用乙醇溶解，移入100ml容量瓶中，稀释至刻度。1ml此溶液含100µg可的松。

3.2 醋酸可的松标准溶液：准确称取醋酸可的松（Cortisone acetate，C₂₃H₃O₆，402.49）10.0mg，用乙醇溶解，移入100ml容量瓶中，稀释至刻度。1ml此溶液含100?g醋酸可的松。

3.3 氢化可的松标准溶液：准确称取氢化可的松（hydrocortisone,C₂₁H₃₀O₅ ,362.47）10.0mg，用乙醇溶解，移入100ml容量瓶中，稀释至刻度。1ml此溶液含100µg氢化可的松。

3.4 醋酸氢化可的松标准溶液：准确称取醋酸氢化可的松（hydrocortisone acetate，C₂₃H₃₂0₆，404.5） l0.Omg，用乙醇溶解，移入100ml容量瓶中，稀释至刻度。1ml此溶液含100?g醋酸氢化可的松。

3.5 泼尼松标准溶液:准确称取泼尼松(Sigma公司制,Prednesone,C₂₁H₂₆O₅,

358.44)10.0mg,用乙醇溶解,移入100ml容量瓶中、稀释至刻度。1ml此溶液含100?g泼尼松。

3.6 强的松龙(氢化泼尼松)标准溶液:准确称取强的松龙(Merck公司制,Pred-nislolone,C₂₁H₂₈O₅,360.45)10.0mg,用乙醇溶解,移入100ml容量瓶中,稀释至刻度,1ml此溶液含100µg此溶液含100µg强的松龙。

4 仪器

4.1 高效液相色谱仪：具荧光检测器和紫外吸收检测器。

4.2 浓缩器： KD浓缩器及旋转浓缩器。

5 分析步骤

5.1 样品预处理

称取1.0～5.0g样品于烧杯中，加入100ml饱和氯化钠溶液，充分混匀，移入300ml分液漏斗，加5m1 10％硫酸，50ml二氯甲烷，振摇5min，静置分层,分取二氯甲烷层。再加50ml二氯甲烷萃取一次，合并二氯甲烷层，用50ml水洗涤，无水硫酸钠脱水，用旋转浓缩器蒸发至近干。残留物用100ml己烷溶解、移入分液漏斗，加50ml己烷饱和的乙腈,振摇5min,分取乙腈层，用KD浓缩器浓缩，用乙醇稀释至5ml作为样品溶液。

5.2 色谱条件

色谱柱：ZorbaXSIL 250mm×4.6mm id。

流动相：己烷+氯仿+乙醇（7+2+1）。

流速：lm1／min。

检测器：紫外吸收检测器（波长240nm）。

柱温：室温。

5.3 分析步骤

5.3.1 定性

分别移取各种肾上腺皮质激素标准溶液；用乙醇稀释，配成1ml各含5µg的标准液。分别取10µl注入高效液相色谱仪，求出各标准物的保留时间。

取样品溶液10?l、注入高效液相色谱仪，求出保留时间，与相应的标准物保留时间进行比较定性。

5.3.2 定量

5.3.2.1 标准曲线：分别取适量标准溶液3.1～3.6，用乙醇稀释为0、l.0、2.5、5.0、7.5、10.0µg/m1的标准系列，分别取10µl注入色谱仪，记录峰高（或峰面积），绘制峰高（或峰面积）-浓度的标准曲线。

5.3.2.2 测定：吸取10?l样品溶液注入色谱仪，记录各肾上腺皮质激素的峰高或峰面积，从标准曲线上求出各自相应的浓度A（?g/ml）。

6 计算

c=A×V/m

式中：
c－一样品中各肾上腺皮质激素含量，µg／ｈ；

A——标准曲线上查出的各肾上腺激素的浓度，µg/m1；

W－一样品液的总体积，ml；

m一－样品的质量，g。

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