离子对高级液相色谱法

用荧光检测器可快速、简单地测定化妆品中的8种水溶性荧光焦油色素，本方法灵敏度高、测量误差小，易于推广。

1 适用范围

本方法适用于测定化妆品中水溶性荧光焦油色素，各种色素检测限见表2-3-31。^（1）

2 原理

样品中的水溶性荧光焦油色素经超声波提取后，溶解在有机相中的水溶性荧光焦油色素，用离子对高效液相色谱进行分离定性、定量。

3 试剂

3.1 乙脂。

3.2 甲醇：优级纯。

3.3 0.05mo1／L磷酸二氢钠溶液。

3.4 0.002mo1／L四溴己胺（THA）。

3.5 0.002mol/L四溴丁胺（THPA）。

3.6 0.002mo1／L十二烷基苯磺酸钠（DBS）。

3.7 0.002mol/L氯化十六烷基三甲基胺（CTA）。

3.8 色素标准品

3.8.1 红色3号（原藻红， Erythrosine），C.I.45430序号1。

3.8.2 红色104号（玫瑰红， Phloxine），C.I. 45410序号130。

3.8.3 红色105号（孟加拉红， Rosebengal）。

3.8.4 红色106号（酸性红， Acid red）。

3.8.5 绿色204号（一羟基3，6，8芘三磺酸钠，Pyranineleconc），C.I. 61565序号34。

3.8.6 红色230一1号（曙红rs Eosine），C.I.45380序号ll。

3.8.7 红色213号（蔷微红B Rhoclmine）,C.I.45170序号9。

3.8.8 黄色202一2号（荧光黄钠，Uranine）C.I. 45350序号23。

3.9 标准溶液

精确称取上述各种色素标准品10.0mg，用甲醇溶解定容至100ml。

4 仪器

高效液相色谱仪：具岛津LC一6AD型自动进样器；日本分光820一FP型荧光检测器；岛津SPD一6AV型可见光紫外检测器。

超声波水浴。

5 分析步骤

5.1 样品预处理

5.1.1 固体样品：称取样品0.5～2.0g置于50ml离心管中，加甲醇20ml混匀，用超声波水浴提取15min后，离心10min（3000r/min）。上清液用过滤器过滤，滤液作为待测样品溶液。

5.1.2 液体样品：，称取液体样品⁽³⁾，用甲醇进行适当稀释，过滤，滤液作为待测样品溶液。

5.2 色谱条件

色谱柱:Tsk gel ODS 80TM （5µm，4.6mm id×l50mm）；CAPCELL PAKC₁₈（5µm，4.6mm id×l50mm）。⁽¹⁾

流动相及检测波长见表2-3-32。⁽¹⁾

流速：1ml/min；柱温： 40℃；进样量：10?l。

5.3测定

5.3.1 定性：吸取10µl各种色素标准溶液，注入HPLC，求出保留时间。取待测样品溶液10µl，注入HPLC与标准保留时间比较进行定性。

5.3.2 定量：吸取各种色素标准溶液，用甲醇稀释，配制成每毫升含0～20ng的标准系列，各取10µl注入HPLC，记录峰高或峰面积，绘制标准曲线。取待测样品溶液10µl注入HPLC，记录峰高或峰面积，从标准曲线查出对应的各种色素含量A（ng/m1）。

6 计算

色素浓度（µg/g）=A×V/m×1/1000

试中：
A一一从标准曲线查出的各种色素含量，ng/m1；

V一－样品溶液稀释的总体积，m1；

m――样品质量，g。

7 精密度和准确度

薄层色谱测定香波中色素时，表面活性剂干扰测定。但用本法进行回收试验未见干扰，香波中加入红色213号20ng/g，5次平均回收率为98.3％，变异系数2.6％。同时分析了市售香波、护发素、化妆水、膏霜、冷烫精等样品，含量在0.0059～2. 55mg/g之间。

注解：

（1）各种色素的定量限如表2-3-31所示。

表 2-3-31 荧光检测器的检测限(µg/ml)

（2）不同色素的色谱条件不同。碱性色素红色213号用聚合型色谱柱CAPCE1l PAKC₁₈，其他色素用TSK，凝胶色谱柱ODS 80_TM

不同色素的最佳流动相和激发、发射波长不同，对检测灵敏度的影响也很大，应选用最佳条件，如表2-3-32。

表 2-3-32 水溶性焦油荧光色素的HPLC测定的最侍条件

注:①甲醇+乙腈+0.05mol/L磷酸二氢钠(35+15+50)

②0.005mol/L

③0.002mol/L

④用磷酸调pH值