HPLC
3，4，4′三氯二苯脲为白色粉末，熔点为255.2～256℃（Merek
Index）。用丙酮溶解再结晶后为白色针状物质。不溶于水及多种有机溶剂，在N，N-二甲基甲酰胺溶剂中溶解度为35％，在甲基异丁基酮中溶解度为4％，在二(口恶)烷和乙醇中溶解度为2％，丙二醇中溶解度为1％。本品的乙醇溶液最大吸收波长为265nm。本品具有防腐、杀菌作用，尤其对革兰氏阳性菌有特效。常添加在肥皂、香波等化妆品中。化妆品卫生标准规定最大允许浓度为3％。
1 适用范围
本方法适用于测定化妆水、香波、肥皂、膏霜等化妆品中的三氯二苯脲。
2 原理
三氯二苯碱能溶于乙醇、丙酮等有机溶媒。经超声波溶解提取后，有机相中的三氯二苯脲用高效液相色谱进行定性、定量。
3 试剂
3.1 无水乙醇：优级纯。
3.2 乙睛：分析纯。
3.3 丙酮：分析纯。
3.4 三氯二苯脲标准溶液
准确称取3，4，4′三氯二苯脲100mg,用无水乙醇溶解定容至100ml。此溶液1ml含10.0g三氯二苯脲。
4 仪器
4.1 高效液相色谱仪：具紫外吸收检测器。
4.2 超声波。
5 分析步骤
5.1 样品预处理
化妆水、膏霜、香波类样品约称取1.0～5.0g(1)，置于50ml离心管中，加无水乙醇约40ml，用超声波充分振荡提取，使三氯二苯脲溶于乙醇中并稀释至50m1。如果溶液混浊须经离心或过滤，上清液作为待测样品溶液。
肥皂类样品约称取0.5g(1)，加丙酮30ml，用超声波充分振荡提取后过滤。滤液移入50ml容量瓶中，用5ml丙酮洗涤残留物，洗涤二次，合并于容量瓶中并稀释至刻度。
5.2 色谱条件
色谱柱：十八烷基硅烷结合硅胶：（内径4.6mm，长150mm(2)，颗粒直径5?m）。
流动相：乙腈十水（7＋3）。
流速： lml/min。
检测器、紫外吸收检测器（265nm）。
5.3测定
5.3.1 定性
吸取5ml标准溶液于50ml容量瓶中，加乙醇至刻度，取5µl注入HPLC，求出保留时间。取样品溶液5µl注入HPCL，与标准保留时间比较进行定性。
5.3.2 定量
吸取标准溶液加无水乙醇（或丙酮）稀释成1ml相当含0.0、5.0、7.5、10.0、12.5、15.0?g的标准系列，依次取5µ1注入HPLC。记录峰高或峰面积，绘制标准曲线。
吸取待测样品5?l注入HPLC，记录峰高或峰面积，从标准曲线查出对应的三氯二苯脲含量A（µg/ml）。
6 计算
c=A×V/C×1/1000
式中：
c――3,4，4′三氯二苯脲含量（％）；
A－一从标准曲线查出的三氯二苯脲含量，?g；
V－一样品溶液稀释总体积，m1；
M－一样品质量，g。
注解:
（1）样品预处理时，所称取的样品中应含约0.5mg的三氯二苯脲。
（2）也可用硅胶色谱柱和5％乙醇＋己烷作流动相，但对羟基苯甲酸酯共存时干扰测定。
（3）添加了三氯二苯脲的化妆水、香波、肥皂等样品用本法进行预处理，测定结果如图2-3-16、图2-3-17、图2-3-18所示。
当羟苯甲酮和超过2倍量的2，2，4′-三氯2′羟基酚醚共存时，会产生误差。为消除干扰可改变流动相的配比。如将乙腈+水由（7＋3）变为(63＋37），羟苯甲酮与三氯二苯脲分离良好，结果如图2-3-19所示。也可用苯乙烯、乙二烯苯多孔聚合物色谱柱，用90～98％碱性甲醇（甲醇用氨水调成碱性）为流动相，三氯二苯脲可与2，2，4′三氯-2′羟基酚醚分离良好。
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