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卤代酚是含酚的卤代化合物，对革兰氏阳性菌有强杀菌作用，用在化妆品中的卤代酚有六氯酚
等多种化合物。这类化合物通常是光敏物质。我国化妆品卫生标准规定为限用物质，限用量见表2-3-17。
表 2-3-17 化妆品卫生标准中卤代酚的限用量
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品名
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序号
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最大使用量（％）
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溴氯双酚
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4-4
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0.1
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双氯酚
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4-7
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0.2
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2，4-二氯二甲苯酚
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4-8
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0.1
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三氯生
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4-21
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0.3
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六氯酚
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4-24
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0.1
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4-溴邻甲苯酚
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4-31
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0.3
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苄氯酚
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4-42
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0.2
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4-氯2-甲苯酚
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4-55
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0.2
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4-氯3，5-二甲苯酚
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4-56
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0.2
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* 指化妆品卫生标准(GB7916-87)中的序号,4-42即表4的序号42
(一)薄层色谱法(TLC)
1 适用范围
本方法适用于化妆品中六氯酚，双二氯酚硫醚、二氯酚和三溴水杨酞替苯胺的定性。
2 原理
样品经预处理后，样液中的卤代酚用的薄层色谱法进行分离、呈色，然后与标准斑点比较，进行定性。
3 试剂
3.1 乙醇：分析纯。
3.2 己烷：分析纯。
3.3 丙酮：分析纯。
3.4 无水硫酸钠：分析纯。
3. 5硫酸（lmol／L）。
3.6 六氯酚标准溶液(1)：准确称取用苯重结晶的六氯酚50.0mg，加丙酮溶解后移入50ml容量瓶中并定容至刻度，避光保存。此溶液1ml含1.0mg六氯酚。
3.7 双二氯酚硫醚(2)：准确称取用苯重结晶的双二氯酚硫醚50.omg，用丙酮溶解，移入50ml容量瓶中并定容至刻度，避光保存。此溶液lml含1.0mg二氯酚硫醚。
3.8双氯酚标准溶液(3)：准确称取用甲苯重结晶的双氯酚50.0mg，用丙酮溶解，移入50ml容量瓶中，定容至刻度。此溶液1.0ml含1.0mg二氯酚，避光保存。
3.9三溴水杨酞替苯胺(4)：准确称取用丙酮重结晶的三溴水杨酞替苯胺50.0mg，用丙酮溶解，移入50ml容量瓶中并定容至刻度。此溶液1.0ml含1.0mg三溴水杨酞替苯胺，避光保存。
3.10 乙醇一己烷（1+9）。
3.ll离子交换纤维素(5)：将DEAE（二乙基氨基乙醇）纤维素，（交换量约0.9meg／g），浸泡于50倍量的0.lmol/L的盐酸中，用玻璃漏斗过滤，用20倍量的丙酮，30倍量的0.lmo1／L氢氧化钠溶液淋洗至OH-型后，用水洗成中性，再用20倍量的丙酮淋洗，弃去丙酮。空气中干燥。保存在乙醇十己烷（l＋9）溶液中。
3.12 硅胶：薄层用硅胶中加有荧光剂。
3.13碱性氧化铝。
3.14展开剂：石油醚+冰乙酸（89+12）
3.15显色剂。
3.15.1 浓氨水。
3.15.2 2％4-氨基安替比林溶液：称取2g4-氨基安替比林用乙醇溶解稀释至100ml。
3.15.3 8％铁氰化钾溶液（K3［Fe（CN）6]）。
3.15.4 2％三氯化铁溶液（FeCl3·6H20）：称取2g三氯化铁用乙醇溶解稀释至100ml。
3.15.5 2％铁氰化钾溶液。
3.16 盐酸+丙酮溶液：9.5ml盐酸加丙酮至100ml（临用前配制）。
4 仪器
4.1 层析柱：、内径10mm、高200mm的具塞玻璃管的下端熔接玻璃过滤器或塞有玻璃棉，
4.2 紫外灯，具有8W功率,254nm波长。
4.3离子交换柱(6)：将离子交换纤维素用乙醇+已烷（3.11）配成混悬液，：用湿式填充法缓慢倾入层析柱中，以防止产生气泡，填充高度80mm。
5 分析步骤
5.1样品预处理（7）（8）
称取含卤化酚0.5mg的样品（扑粉，除臭砂芯、香波约10g，膏霜约0.5g），置于100ml玻璃瓶中，连接好回流冷凝器：加50ml乙醇+已烷（1+9）溶液，2ml
1mol/L硫酸，于水浴上加热3min，冷却后用3号玻璃砂芯漏斗过滤，用乙醇+己烷（1+9）溶液5ml洗沉淀，滤液移入分液漏斗中静置分层。取己烷层用10ml水洗涤，无水硫酸钠脱水后以0.5ml/min的流速注入离子交换柱（10）。用50ml己烷洗涤。去除油脂等干扰物质，弃去淋洗液，依次用10ml丙酮、2ml丙酮+盐酸溶液（3.16），20ml丙酮洗脱（11）。溶出液在水溶上加热蒸去有机溶媒，加5ml乙醇，加热使盐酸挥发，重复此操作2次。残渣加2.0ml丙酮溶解，作为样品待测溶液。
5.2 制备薄层板
5.2.1硅胶薄层板：硅胶30g，加水约65ml，搅拌均匀，涂布成厚度0.25～0.3mm的薄层板，105～l10℃干燥30min，置干燥器中保存。
5.2.2含硝酸银的氧化铝薄层板：0.12g AgNO3，加少量水溶解，加30ml乙醇、20g氧化铝，调成浆状物，涂布厚度为0.25～O.3mm的薄层板，空气中干燥、于干燥器中避光保存。
5.3 点样
距薄层板底边2cm处将5～20?l待测溶液从左到右点样（12），两点间隔约1cm，薄员板.的右边点2µl标准溶液，空气中干燥。
5.4 展开
取适量展开剂（3.14）倾人展开槽中，将薄层板放入展开剂中，待溶剂上升约10cm，取出薄层板，空气中干燥。
5.5显色（13）
在薄层板上顺序喷雾显色剂3.15.1～3.15.3或3.15.4～3.15.5，六氯酚在显色剂3.15.1～3.15.3中为红色，在3.15.4～3.15.5中为蓝色斑点。二氯酚硫醚和三溴水杨酞替苯胺在3.15.1～3.15.5中为紫色,在3.15.4～3.15.5中呈现蓝色斑点。
用加荧光剂的硅胶薄层板测定时，各种卤代酚在紫外线照射下，在各自的Rf 值位置上以荧光为背景呈现出暗黑色的斑点。
注解：
（1）六氯[2，2′-Metbylenebis（3，4，6-trichlorophenol）]（C13H6Cl6O2，406.93）是无臭、白色结晶性粉末，易溶液于丙酮、苯、乙醇、乙醚、氯仿等有机溶媒，不溶于水。
六氯酚具有二个羟基，在碱性下其中一个羟基和碱反应生成酚盐，另一个羟基具有杀菌效果。对革兰氏阳性菌有特效；对革兰氏阴性菌抑菌效果弱；对耐氧菌、芽胞菌、霉菌及螺旋体无效，石炭酸系数是125。一般添加在肥皂、膏霜、婴儿扑粉、洗发粉、洗发香波、生发水等化妆品中。本品是光敏物质之一。
（2）双二氯酚硫[2，2′thiobis（4，6-dichlorlphenol）]（C12H6Cl4S，356.06）是无臭白色的结晶粉末,易溶于丙酮、乙醚，微溶于乙醇、氯仿，不溶于水。
用硝酸银+氧化铝薄层板时，放置在距紫外灯10cm以内照射30min，如有卤代酚可观察到灰～灰黑色斑点，比较样品溶液和标准溶液斑点的Rf值及色调，进行定性（12、13）。见表2-3-18。
表 2-3-18 各卤代酚的Rf 值和灵敏度
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硅胶板（a）
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含0.4%的氧化铝板
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化合物名称
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Rf 值
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颜色和灵敏度(?g)
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Rf 值
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灵敏度(?g)(UV254nm)
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氨基比林法
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三氯化铁法
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六氯酚
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0.44
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红(5)
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蓝(3)
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0.56
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(1)
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二氯酚
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0.15
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红(5)
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蓝(1)
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0.17
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(1)
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溴氯化酚
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0.48
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红紫(5)
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蓝(3)
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0.64
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(1)
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双二氯酚硫醚
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0.43
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紫(5)
|
蓝(5)
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0.52
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(1)
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水杨酸
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0.08
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红(5)
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蓝(1)
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/
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/
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四溴甲酚
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0.41
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紫(5)
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蓝(5)
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0.46
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(5)
|
|
三溴水扬酰替苯胺
|
0.43
|
紫(5)
|
蓝(5)
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0.47
|
(5)
|
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对酚磺酸锌
|
0
|
红(5)
|
蓝(3)
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/
|
/
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注 ( ) 内为灵敏度, µg。
（a）展开剂：石油醚+醋酸（88+12）。
双二氯酚硫醚具有二个羟基，过量的碱只和一个羟基反应，所以在碱性下仍具有杀菌效果，对革兰氏阳性菌有效。主要添加在消毒肥皂中。本品也是光敏物质。
（3）双氯酚［2，2.Methylenebis （4-chlorophenol）］（C13H8Cl6O2，269.12）商品名称CompoundG4（SindarCorp）为白色粉末，稍有酚的臭味，溶于丙酮、乙醇，不溶于水。双氯酚是光敏物质。
（4）三溴水杨酰替苯胺（3，4′，5-Tribromosalicylicylanilide，C13H8O2NBr3，449.94）是白色细微粉末，有酚臭味，易溶于丙酮，微溶于甲醇、氯仿，不溶于水和苯。
（5）Br0wn 公司生产的DEAE纤维素，交换容量是0.89～9.2meq／g（Cl-型）。Serra公司生产的DEAE纤维素交换容量较小，约0.68meq／g，粒度也细。前者较适用。
（6）填充离子交换纤维素后，在层析管内插入直径1.5mm、长约250m的细玻璃捧，上下慢慢搅动，使纤维素悬浊，能有效地去除气泡。（7）卤化酚在DEAE-纤维素层析柱和乙醇+己烷固-液相中进行分配，以除去油分等干扰。用丙酮+盐酸-丙酮溶液能定量地溶出六氯酚等杀菌剂。（8）化妆品与特殊功能化妆品中六氯酚的使用量有很大差别。统一规定称样量是很困难的。膏霜类样品称取量大于lg时，前处理效果不理想，所以要减少称样量。婴儿香粉、洗发香波、生发水等样品称取10g也不影响前处理效果。（9）样品中的卤代酚在无水己醇+己烷（1+9）混合液中和硫酸酸性条件下，加温可被浸提溶出。肥皂形成脂肪酸而溶解。此阶段不要加水，在乙醇共存下由于表面活性剂的作用不会乳化。但膏霜样品与肥皂不同，即使把乙醇+己烷的混合比由1+l提高到9+l，用水洗涤时，无论是水包油型还是油包水型，液体均混浊。在柱层析时将使流速变慢，阻碍吸附。用甲醇、异丙酮、二氧六环代替乙醇结果也不理想，因此要控制取样量。
（10）GE-纤维素和ECTE-OLA纤维素不吸附卤代酚。Dowex－2X8等多种阴离子交换树脂虽然吸附性很强，但解析非常困难。
（11）除六氯酚等四种氯化酚外，溴氯化酚也能定量解析。氯二甲苯酚和四溴甲酚混合物中的四溴甲酚虽能定量吸附，但不能全量解析。间苯二酚、2，2，4′三氯2′-羟基二苯醚DP300、氯二甲苯酚、三氯二苯脲、3-三氯甲基-4，4二氯酰替苯胺等防腐剂不被吸附，全部被己烷溶出。不溶于水的月桂酸虽然部分吸附，但用盐酸+丙酮溶液解析时脂肪酸不溶出，所以不影响卤代酚定量。
（12）国家卫生标准规定六氯酚的最大允许浓度为0.1％，若限制取样量为1g，待测溶液总体积为2.0ml，六氯酚浓度相当于0.5mg／ml如果在薄层板上点样5～20?l，相当于2.5～10?g，稍高于方法灵敏度（3～5µg），因此点样量要稍高于20?l。
（13）酚类防腐剂呈色时，若显色剂按3.15.2、3.15.3、3.15.1的顺序进行喷雾，背景容易着色，检出灵敏度的再现性差，3.15.1～3.15.3的喷雾顺序测定结果好。
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