1 应用范围

本法适用于唇膏、雪花膏、化妆品及痱子粉等化妆品中的异丙基甲酚的测定。

2 原理

样品中的异丙基甲酚在H₂SO₄介质条件下，用二氯甲烷萃取，然后蒸干萃取液，用乙醇定容。将乙醇溶液注入高效液相色谱仪，以荧光检测器检测，与同样处理的已知标准溶液比较进行定性和定量测定。

3 试剂

3.1 异丙基甲酚的标准溶液:精确称取异丙基甲酚50.0mg溶于乙醇中定容至50.0ml。取此溶液5.0ml用乙醇稀释至50ml,此液1.0ml含100.0µg异丙基甲酚。

3.2 内标准溶液:精确称取百里酚25.0mg溶于水500.0ml乙醇中。

3.3 柱填充剂:氨丙基硅烷键合硅胶,十八烷基硅烷键合硅胶。

3.4 流动相:已烷+乙醇(9+1);水+乙腈(1+1)。

4 仪器

4.1 高效液相色谱仪:具荧光检测器。

5 分析步骤

5.1 样品的预处理

精确称取样品约0.5～2.5g⁽²⁾,加饱和NaCl溶液50ml,移入分液漏斗中,加10%H₂SO₄ 1ml,30ml二氯甲烷,振摇5min,静置分层.水层再各用20ml二氯甲烷提取二次，合并全部二氯甲烷，用50ml水洗涤，用无水硫酸钠脱水后^（3），在旋转蒸发器上（水浴约40℃）蒸去二氯甲烷^（4），于残留物中加入内标液5.0ml⁽⁵⁾,用乙醇定容至50ml⁽⁶⁾作为待测溶液。

5.2 测定

5.2.1高效液相色谱条件

5.2.1.1色谱柱⁽⁷⁾：氨丙基硅烷键合硅胶（内径4.6mm、长250mm）。

流动相：己烷一乙醇(9＋1）。

流速：1.2m1／min。

5.2.1.2色谱柱⁽⁸⁾：十八烷基硅烷键合硅胶（内径4.6mm、长15Omm）。

流动相：水+乙腈(1+1）。

流速：1.0ml／min。

5.2.2荧光检测器波长：激发波长280nm，荧光波长305nm。

5.2.3定性：取5.0ml标准溶液与5.0ml内标溶液于50.0ml容量瓶中，混匀,然后加乙醇至刻度。取此液2.5进行高效液相色谱分析，从得到的色谱图求出内标物对异丙基甲酚的相对保留时间。

同样取2.5?l待测溶液，如上述方法操作。从得到的峰求出对内标物的相对保留时间与标准溶液时行比较而定性。

5.2.4定量：取2.5µl待测溶液进行高效液相色谱分析。通过异丙基甲酚的峰高（或者峰面积）与内标物质的峰高（或者峰面积）之比，从预先做成的标准曲线中求出待测溶液中异丙基甲酚的浓度A（µg/m1）。

5.2.5标准曲线的制备：分别取异丙基甲酚标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0及6.0ml于50.0ml容量瓶中，分别于每个容量瓶中加入内标准溶液5.0ml，立即加乙醇至50.0m1。分别取2.5µl此溶液进行高效液相色谱分析，求出异丙基甲酚与内标物的峰高（或峰面积）之比值，做标准曲线。

6 计算

c=A×V/(m×1000×1000)×100

式中；
c－一样品中异丙基甲酚的含量，%；

A――从标准曲线上查得待测溶液中异丙基甲酚浓度，µg/m1。

V一－测定用待测溶液的体积，m1；

M－一样品质量，g。

注解：

（1）异丙基甲酚是间甲酚和异丙基化物或异丙醇在触媒存下反应所得的无色或白色针状结晶。本品因具有杀菌力，抗酸、抗氧化性，还具有弱的收敛性，作为防腐剂被应用于化妆品中。我国化妆品的卫生标准规定其加入量不得大于0.1％（W／W）。

（2）样品的称取量应控制异丙基甲酚在150～500g范围内。

（3）样品如溶于乙醇时，可省去萃取操作。精确称取样品约0.5～2.5g，加内标溶液5m1，乙醇定容至50ml，作为待测溶液，但对含水分多的样品可用色谱条件5.2.1.2按反相色谱柱的方法进行分析或用无水硫酸钠脱水。

（4）溶剂完全蒸去后，若再继续加热，将造成异丙基甲酚因升华而挥散，应引起注意。

（5）内标物最终浓度在5?g/ml左右为适宜。但在待测溶液中，有与内部标准物质溶出时间几乎相同的物质时，应按标准曲线法定量。选用色谱条件5.2.1.1时，可用雌二醇作内标，选用色谱条件5.2.1.2时，可用p-羟基苯甲酸仲-丁基酯作内标。

（6）用本条件测定时，待测溶液中异丙基甲酚的浓度在1～12µg／m1内为宜。

（7）图2-3-22为条件5.2.1.1测定的色谱柱。

（8）图2-3-23为条件5.2.1.2测定的色谱柱。而用本条件测定时，对羟基苯甲酸丁酯与异丙基甲酚的峰分离不好。若对羟基苯甲酸含量高时，用条件5.2.1.1的正相色谱柱方法进行为好。