l 适用范围

本方法适用于各种类型化妆品中的对羟基苯甲酸酯的定性、定量。最低检测限为50～150pg。

2 原理

溶解在甲醇溶液中的对羟基苯甲酸酯电解氧化后，用电化学检测器一高压液相色谱测定。

3 试剂

3.l 对羟基苯甲酸酯混合标准贮备溶液：精确称取对羟基苯甲酸甲、乙、丙、丁酯，异丙酯，异丁酯，仲-丁酯标准品10.0mg。用甲醇溶解后移入100ml容量瓶中并定容至刻度。

3.2 水杨酸酯内标溶液⁽¹⁾（IS）：精确称取水杨酸酯10.0mg，用甲醇溶解，移入100m1容量瓶中并定容至刻度。

3.3 甲醇：色谱纯。

3.4 其它试剂：优级纯。

4 仪器

4.l 高压液相色谱：柳本制（L-2000）型或等效色谱仪。

4.2 电化学检测器：柳本制UMD型或等效物。

4.3色谱柱，4.6id×100mm的玻璃填充柱。

4.4 循环伏特安培计， Bionalytical公司制品BAS 1000型或等效物。

5 分析步骤

5.1 样品的预处理

称取样品约50mg，加lml水⁽²⁾、1ml甲醇，超声波均质后，3000r/min离心3min，取上清液，用0.4?m膜滤器过滤，1ml滤液加适宜浓度的0.2m1内标溶液。

5.2 色谱条件

色谱柱，chen Cosorb 5-0DS-H（5?m）（4.6id×l00mm）。

流动相：甲醇⁽³⁾＋0.05ml/L乙酸-乙酸钠缓冲溶液⁽⁴⁾＋吡啶⁽⁵⁾（75＋25＋0.5）混合溶液中含有20mmol/L的过氯酸钠^（6）。

电化学检测器设定电位：+1.2Vvs^（7）。

5.3 测定

5.3.1 标准曲线:吸取对羟基苯甲酸酯混合标准贮备液,用甲醇稀释,配制成每毫升含0.1～100ng浓度标准系列⁽⁸⁾,分别取1.0ml,加0.2ml适宜浓度的内标溶液(3.2)。分别取2µl注入HPLC,记录保留时间,测量各种酯及内标物的峰高(或峰面积),求出二者比值。以浓度为横坐标，比值为纵坐标，绘制标准曲线。

5.3.2 吸取样品溶液2?l，与标准同样操作，以保留时间定性。由标准曲线查出对应的各种酯的含量A（pg/ml）。

6 计算

c =A×V/m×10^-7

式中：
A――从标准曲线查出的样品溶液中对羟基苯甲的酸酯含量，ng/ml；

V――样品溶液稀释的总体积，ml；

M――样品质量，g。

7 精密度和准确度

膏霜、粉底霜样品的七种对羟基苯甲酸酪的回收率在97.9～104.8之间。相对标准偏差1.22～1.81%。

注解：

（1）按本法设定的条件测定七种对羟基苯甲酸酯，内标物质的电化学活性，只有在+1.2Vvs以下时才被氧化,并且不和七种酯重叠,所以选用水杨酸酯作为内标。

图2-3-28是七种对羟基苯甲酸酯及内标物质的分离图谱。

（2）样品如果是脂溶性，先加1ml甲醇，再加1ml水。

（3）甲醇浓度影响各种对羟基苯甲酸酯的保留时间及分离效果见图2-3-29，80～90%浓度甲醇为流动相，七种酯类分离不好，正丁酯与异丁酯重叠，75%甲醇为流动相，各种酯类分离良好，10min内完全分离。

（4）乙酸-乙酸钠的浓度及pH影响对羟基苯甲酸晶的保留时间。0.05～0.15mol/L的缓冲溶液，pH3～7时各种峰分离良好。

（5）加入吡啶后基线能很快稳定。

（6）用电化学检测器，电解质的最佳浓度是10～20mmol/L，因此流动相中加20mmol/L的过氯酸钠。

（7）对羟基苯甲酸酯的电极反应如下：

对羟基苯甲酸酯被电解氧化，放出2个电子，羟基变成酯式结构，COOR基不参与电解反应，分子带正电。循环伏特安培计，以玻璃碳电电极为反应电极，图2-3-30。是一种对羟基苯甲酸酯的氧化峰的电流-电压曲线，由此看出在＋1.1VvsAg/AgCl附近电流值最大。但静止状态和流动状态的最高响应电位有些差异，改变电化学检测器的设定电位，制成笔录式极谱仪，±1.15～1.25VvsAg/AsCl，响应值最高，因此设定电位值为+1.2VvsAg／AgCl，见图2-3-31。

（8）按本法测定条件，对羟基苯甲酸酯在10¹⁰～10^-7g范围内呈良好的线性关系。