日柏醇（hinokitio）具有杀菌力强、抗菌范围广的特点。对化脓性齿龈炎有治疗和预防作用，还具有去除口臭的效果，很早以前就用于牙膏中。作为防腐杀菌剂使用在各种生发化妆品中。

用HPLC测定化妆品中的日柏醇，方法简便、快速，再现性好。

1 应用范围

本方法适用于牙膏和生发水中日柏醇的测定。回收率在95～100％，相对标准偏差为0.8～3.5％

2 原理

日柏醇和金属铜离子生成稳定的络合物，用反相色谱法进行定量分析。

3 试剂

3.1 日柏醇标准溶液：准确称取日柏醇200.0mg置于100ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。取此溶液10.0ml，用甲醇定容至100ml。此溶液1.0ml含日柏醇0.20mg。

3.2 内标溶液^（1）：准确称取邻硝基苯胺80.0mg用甲醇溶解并定容至100ml。

4仪器

4.1高效液相色谱仪：岛津LC－6A型，具有紫外吸光检测器^（2）。

4.2积分仪：CR-3A型。

4.3紫外可见光分光光度计；UV IDEC-610C型。

5分析步骤

5.1样品预处理

5.1.1 准确称取生发水（约含0.4mg日柏醇），加5ml内标溶液、1ml l％硫酸铜^（3），加甲醇稀释至20.Om1。

5.1.2 牙膏：称取约含日柏醇0.4mg的样品，加入5ml内标溶液、1ml l％硫酸铜溶液，加甲醇稀释至20.0ml作为待测溶液。

5.2 色谱条件。

色谱柱：内径4.6mm长250mm。不锈钢填充柱，填充Cosmosi15C-18（5µm）；

柱温： 40℃；

流动相：甲醇+水（1＋l）含有0.2％硫酸铜溶液⁽⁴⁾;

流速:1.0ml/min。

5.3 测定

取日柏醇标准溶液1.0、2.0、3.0ml分别加5.Oml内标溶液及1ml l％硫酸铜溶液，用甲醇稀释至20.0ml。分别吸取10.0µ1注入HPLC，测定日柏醇与内标物质的峰高（或峰面积），求出二者比值，以浓度为横座标、比值为纵座标绘制标准曲线⁽⁵⁾。

取10?g样品溶液注入HPLC,以保留时间定性。由标准曲线查出样品溶液中日柏醇含量Aµg/ml。

6 计算

c=A×V/m×1/1000

式中:
c一一日柏醇含量，(％);

A――由标准曲线上查出样品溶液中日柏酵的含量，mg/m1；

V――样品溶液稀释的总体积，ml；

M――样品质量，g。

注解：

(1）邻位硝基苯胺与待测物及干扰峰分离良好，所以选为内标物。在本实验条件下，内标物出峰时间～5min，日柏醇出峰时间～8min。

（2）日柏醇的最大吸收波长为240～250nm，日柏醇和铜离子生成的络合物吸收波长有325nm与385nm两个峰（见图2-3-34）。由于在240～250nm波长范围内,化妆品及牙膏中的量料干扰峰较多,因此本法用325nm滤长进行测定。

（3）日柏醇与铜离子生成络合物需要一定量的铜离子浓度，加入的铜离子大于日柏醇量的1/2时，吸光度值稳定不变，取日柏醇与铜离子以2:1比例络合（见图2-3-35）。但考虑到样品中可能含有与铜离子反应的其它化合物，在分析样品时，加入的铜离子量应大于日柏醇含量的20倍。

（4）在100ml甲醇+水（1+1）溶液中，加0.005～0.48g硫酸铜。测定日柏醇与铜离子生成的络合物的保留时间。硫酸铜的浓度越大，保留时间越短；当硫酸铜加入量低时，有拖尾现象；硫酸铜量为0.1％时，呈对称峰形，因此采用加入0.1～O.4％硫酸铜量为宜。

（5）标准曲线日柏醇络合物与内标物的浓度和峰面积比的相关系数为0.9999，具有良好线性关系。