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1 应用范围
本法适用于化妆品中2-苯氧基乙醇等22种防腐剂的测定,见表2-3-21(1)。
表 2-3-21 22种防腐剂名称及最大允许加入量
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序号
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EEC命名
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中文命名（*）
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最大许可浓度（%）
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1
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2-Phenoxyethanol
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2-苯氧式乙醇（4-37）
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1.0
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2
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p-Hydoxybenzoic acid，methyl ester（acid）
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对羟基苯甲酸甲酯（4-46）
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0.4
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3
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1-Phenoxy-2-propanol
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1-苯氧基-2丁醇（4-38）
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1.0
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4
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Glycerol p-chlorophenyl ether
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0.5
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5
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p-Hydrlxybenzoic acid，ethyl exter（acid）
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对羟基苯甲酸乙酯（4-46）
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0.4
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6
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2,4-Dichlorobenzyl alcohol
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2,4-二氯苄醇(4-6)
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0.15
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7
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p-Chloro-m-cresol
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4-氯-3-甲苯酚(4-55)
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0.2
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8
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4-Chloro-3,5-dimethylphenol
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4-氯-3,5-甲苯酚(4-56)
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0.5
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9
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4-Isopropy1-3-methylphenol
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4-异丙基-3-甲苯酚(4-32)
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0.1
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10
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p-Hydroxybenzoic acid,n-bthl ester (acid)
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对羟基苯甲酸正丁酯(4-46)
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0.4
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11
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o-Phenylphenol(phenol)
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邻苯基苯酚(苯酚)(4-52)
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0.2
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12
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p-Hydroxybenzoic acid,benzyl ester (acid)
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对羟基苯甲酸苄酯(4-47)
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0.1
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13
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Sorbic acid,isopropyl ester(acid)
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山梨酸异丙酯(4-16)
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0.6
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14
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2,4-Dichloro-3,5-dimethylphenol(I.S)
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2,4-二氯-3,5-二甲基苯酚(4-8)
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0.1**
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15
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5,5-Dichloro-2,2′-dihydroxydiphenyl
–methane |
双氯酚(4-7)
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0.2
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16
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2-Benzyl-4-chlorophenol
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2-苄基-4-氯酚(4-42)
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0.2
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17
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2,4,4′-Trichloro-2′-hydroxydiphenyl ether
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2,4,4-三氯-2-羟基二苯醚(三氯生)(4-21)
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0.3
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18
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3,4,4′-Trichlorocarbanilide
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3,4,4-三氯均二苯脲(氯卡班)(4-18)
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0.2
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19
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Tetrabromo-o-cresol
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四氯-邻甲本酚(4-31)
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0.3**
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20
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4,4′-Dechloro-3-trifluoromethyl-carbanelede
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4,4-二氯-3-(三氟甲基)二苯脲(4-20)
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0.3**
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21
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3,3′-Dibromo-5,5′-dichloro-2,2′-dihydroxy-diphenylmethane
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溴氯酚(4-4)
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0.1
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22
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2,2′-Dihydroxy-3,3′,5,5′,6,6′-hex-achlorodiphenylmethane
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六氯酚(4-24)
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0.1**
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* 化妆品卫生标准（GB7916-87）表4中的序号
** EEC 规定化妆品中禁用。
2 原理
化妆品中防腐剂经过有机溶剂提取后注入高效液相色谱柱,以保留时间定性,以峰高或峰面积定量。
3 试剂
3.1 防腐剂标准溶液
3.1.1 分别称取表2-3-21所列防腐剂各100.0mg,用含1%(V/V)乙酸的四氢呋喃溶液溶解,转移至100ml容量瓶中,并定容至刻度.此溶液每毫升含相应防腐剂1.00mg。
3.1.2 取适量3.1.1于25ml容量瓶内。加入1ml内标溶液（3.2）,用含1%(V/V)乙酸的四氢呋喃溶液稀释至刻度,配成含相应标准的浓度为表2-3-22中所列方法检测限的约3倍～30倍的标准系列。
3.2 内标溶液:称取二氯-间二甲苯酚(1)500mg于100ml容量瓶中,加入含1%(V/V)乙酸的四氢呋喃溶液溶解并稀释到刻度。配成每毫升含二氯-间二甲苯酚5.0mg的内标溶液。
3.3 含1％乙酸的四氢呋喃溶液。
3.4 甲醇：分析纯。
表2-3-22 22种防腐剂HPLC参数(n=5)
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化合物序号*
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保留时间
(min)
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相关响应值
(280nm)
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检测限
(ng)
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?W
(234-311)
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1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14(I.S)
15
16
17
18
19
20
21
22
|
10.70
13.96
18.39
19.50
22.16
26.47
26.93
31.49
32.53
32.87
33.72
34.67
39.46
41.35
42.54
43.62
57.20
58.45
59.57
61.31
65.35
79.90
|
0.22
2.03
0.19
0.75
2.00
0.26
1.21
1.00
1.26
1.80
3.03
1.40
3.08
1.00
1.52
1.12
1.43
3.80
0.37
3.60
0.87
0.91
|
15
5
20
15
5
50
15
20
20
15
10
20
5
20
20
30
15
5
60
5
20
40
|
266.35
255.28
266.67
243.99
255.39
250.53
252.67
248.03
249.07
255.11
269.46
251.74
258.99
253.79
256.71
254.08
246.45
262.66
248.43
263.64
261.39
250.28
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* 同表（2一3一2l）
4仪器
4.1 高效液相色谱仪：具二极管阵列检测器和积分仪。
5分析步骤
5.1样品预处理
称取样品约1.0g于带螺旋盖的离心管中，加入1ml内标溶液（3.2）和
10ml含1％乙酸的四氢呋喃溶液（3.3）。盖紧瓶塞，置于超声水浴中，于60℃恒温超声15min，以溶解类脂，促进分离和萃取。冷却后离心，将上清液用1％乙酸的四氢呋喃稀释至25m1，作为样品溶液。
5.2 色谱条件
色谱柱：0DS 250×4.6mm （Beckman生产或等效物）。
柱温：25℃。
流速：2.3m1／min。
检测器：二极管阵列检测器(2) ，280nm。
流动相，含1%（V／V）醋酸的甲醇-水混合液，按以下梯度洗脱：
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时间(min)
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0
|
15
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25
|
35
|
40
|
50
|
60
|
65
|
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甲醇浓度(%)
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20
|
30
|
40
|
60
|
70
|
80
|
85
|
90
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5.3标准曲线
吸取标准应用液（3.1.2）l0?l，分别注入色谱仪。记录出峰时间和峰高或峰面积，计算与内标峰高或峰面积的比值及相对于内标的保留时间。绘制浓度一峰高或峰面积比值的标准曲线。
5.4 测定
取10?l样品溶液注入色谱仪测定。记录峰高／峰面积，计算与内标峰高／峰面积的比值。由标准曲线查得防腐剂的浓度。
6 计算
c=A×V/(m×10000)
式中：
c－一样品中某防腐剂的含量，％。
A一一从标准曲线查出的样品含量，µg/m1；
V――样品最终体积，m1；
M－一样品质量，g。
7 精密度和准确度
标准曲线的线性关系为0.9979～0.9998。同一天测定的相对标准偏差小于2％，15天内的相对标准偏差约为3％。回收率为92～100％。
注解：
（1）欧州共同体委员会（EEC）近年已禁止在化妆品中使用二氮-间二甲苯酚，故可选此防腐剂为内标。我国化妆品卫生标准（GB7916一87）尚未禁用，故以二氯-间二甲苯酚为,内标时，应谨慎。
（2）表2-3-22所列各防腐剂的检测限是在280nm波长下测定的。表中提供了各防腐剂在234～311nm范围内的最大吸收波长，由此可对各防腐剂峰加以确认并判断峰的纯度。
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