化验室网站

设为首页

关于本站

加入收藏

化妆品中防腐剂分析

十七、苯甲酸等59种防腐剂测定薄层色谱法

1 应用范围

本法适用于化妆品中常用59种防腐剂的鉴别和半守时检测。可检测的浓度相当于化妆品卫生标准允许使用的浓度^（1）。

2 原理

化妆品中防腐剂以萃取、高效薄层板-展开体系分离后，经显色或在紫外光激发下显现样斑。根据未知样斑的R_f 值及显色反应与已知标准的R_f 值及显色特微比较，可以识别可能存在的防腐剂，然后将此品种的防腐剂标准溶液与样品液在同一薄层板上展开，以进一步确认。

3 试剂

3.1 标准溶液：防腐剂标准列于表2-3-24。

表2-3-24 防腐剂的名称、分子式及最大允许用量

代号	化学名称		序号	最大允许用量**（%）
代号	英文名称	中文名称	序号	最大允许用量**（%）
Ac1	Benzoic acid	苯甲酸	4-36	0.5(酸)
Ac2	p-Hydroxyben-zoic acid	对羟基苯甲酸	4-46	单酯0.4(酸)混合酯0.8(酸)
Ac3	p-Hydroxyben-zoic acid，methyl ester	对羟基苯甲酸甲酯	4-46	单酯0.4(酸)混合酯0.8(酸)
Ac4	p-Hydroxyben-zoic acid,ethyl ester	对羟基苯甲酸乙酯	4-16	单酯0.4(酸)混合酯0.8(酸)
Ac5	p-Hydroxyben-zoic acid,propyl ester	对羟基苯甲酸丙酯	4-46	单酚0.4(酸)混合酯0.8(酸)
Ac6	p-Hydroxyben-zoic acid,butyl ester	对羟基苯甲酸丁酯	4-46	单酯0.4(酸)混合酯0.8(酸)
Ac7	p-Hydroxyben-zoic acid,isobutyl ester	对羟基苯甲酸异丁酯	4-46	单酯0.4(酸)混合酯0.8(酸)
Ac8	p-Hydroxyben-zoic acid,benzyl ester	对羟基苯甲酸苄酯	4-47	0.1(酸)
Ac9	Dehydroacetic acid	脱氢乙酸	4-62	0.6(酸)
Ac10	Salicylic acid	水杨酸	4-22	0.5(酸)
Ac11	Sorbic acid	山梨酸	4-16	0.6(酸)
Ac12	Undecylenic acid	+ 一-10-碳烯酸	4-2	0.2(酸)
Ac13	Usnic acid	地衣酸	4-12	0.2
H1	2-Benzyl-4-chlorophenol	苄氯酚	4-42	0.2
H2	3,4-Dichlorobenzyl alcohol	3,4-二氯苄醇	4-5	0.15
H3	4,4′Dichloro-3-(trifluorome-thyl) carbanilide	卤卡班(4,4′-二氯-3-三氯甲基)均二苯脲	4-20	0.3
H4	3,4,4′-Trichloro-carbanilide	3,4,4′-三氯均苯脲	4-18	0.2
H5	3,3′-Debromo 5,5′-dichloro-2,2′dehydroxy-diphenyl-methane	溴氯双酚	4-4	0.1
H6	5,5′-Dechloro-2,2′dihydroxydiphenyl-methane	双氯酚	4-7	0.2
H7	2,2′-Dehydroxy-3,3′,5,5′,6,6′-nexachloro-diphenylme-thane	六氯酚	4-24	0.1
H8	2,4,4′-Tichloro-2′-hydroxydi-phenylether	三氯生(2,4,4′-三氯-2′-羟基二苯基醚	4-21	0.3
H9	N-Trichlorometh-yl-thio-4-cyclo-hexene-1,2-dicarboximide	N-(三氯甲基硫代)环已-4-烯-1,2-二羟酰亚胺	4-19	0.5
H10	p-Chloro-m-cresol	4-氯-间-甲苯酚	4-55	0.2
H11	Tetrabromo-o-cresol	四-溴-邻-甲苯酚	4-31	0.3
H12	2,4-Dechloro-3,5-dimethylphenol	2,4-二氯-3,5-二甲苯酚	4-8	0.1
H13	3,4′,5-Tribomo-salicy-lanililde	三溴沙伦(3,4′,5-三溴水杨酰替苯胺)	3-8	1
H14	p-Chloro-m-xylenol	4-氯-3,5-二甲苯酚	4-56	0.5
H15	5-Chloro-2me-thyl-4-isothia-zoline-3-one+2-nethyl-4-isothiazoline-3-one+magne-sium and calci-un chloride	KATHON CG	4-59	0.005
H16	1,6-di(N-p-chlorophenyl diguanido)hexane,diace-tate,diglu-conater,or dichlorohydrate	洗必泰	4-44	0.3
Ph1	4-Isopropyl-3-methylphenol	4-异丙基-3-甲苯酚	4-32	0.1
Ph2	0-Phenylphenol	邻-苯基苯酚	4-52	0.2(苯酚)
Ph3	8-Hydrox-yquenoline sul-fate	8-羟基喹啉硫酸盐	4-48	0.3
F1	5-Amino-bis-1,3-(2-ethylhexyl)-5-methyl per hy-dropyrinidine	海克替啶	4-26	0.2
F2	5-Bromo-5-ni-tro-1,3-dioxane	5-溴-5-硝基础-1,3-二恶烷	4-64	0.1
F3	2-Brono-2-ni-tro-propane-1,3-diol	溴硝丙醇	4-63	0.1
F4	N-Hydroxyme-thylchloroace-tamide	2-氯-N-(羟甲基)乙酰胺	4-57	0.3(氯乙酰胺计)
F5	1-(3-Chloroal-lyl)-3,5,7-tri-aza-1-azonia adamantane chloride			(0.2)
F6	p-Chlorophenyl glyceryl ether			(0.5)
F7	Hexamethylene tetramine	六亚甲基四胺(乌洛托品)	4-66	0.2(甲醛)
F8	1,3-(Dihydrox-y-methyl)-5-dimethyl hy-dantoin	1,3-双(羟甲基)-5,5-二甲基咪唑啉-2,4-二酮	4-28	0.2(甲醛)
F9	1-(Hydrox-ymethyl)-5-dimethyl hy-dantoin	1-羟甲基-5,5-二甲基-乙内酰脲	4-49	0.2(甲醛)
F10	Imidazo-lidinylurea	咪唑烷基脲	4-27	0.6
F11	Tri (?-hydrox-yethyl hexahy-drotriazine)			(0.3)
Py1	2-Hydroxypyri-dine N-oxide	1-氧代-2-羟基吡啶	4-45	0.2
Py2	Bis(N-oxopy-ridyl-2thio)aluminum cam-phosulfomate)	吡啶硫酮铝樟磺酸盐	4-35	0.2
Py3	2,2′-Dithio-bis-pyridine 1,1′-dioxide(ad-ditive compo-und with ma-gmesium sulfate trihydrate	2,2′-二硫代又(1-氧代吡啶)与三水合硫酸镁加合物	4-13	0.5
Py4	Sodium(2-pyridylthio)N-oxide	吡啶硫酮钠	4-34	0.5
Py5	Zenc bis(2-pyridylthio)N-oxide	吡啶硫酮锌	4-33	0.5
Am1	1,3-Di(4-amidino-2-bro-mophenoy)n-propane	二溴丙脒	4-11	0.1
Am2	1,6-Di(4-amidino-phe-noxy)n-hexane	已脒定	4-25	0.1
Q1	Alkyl(C₈-C₁₈) dimethylben-zylammonium chloride			(0.5)
Q2	Alkyl(C₈-C₁₈) dimethyl-benzy-lammo-nium saccharinate			(0.5)
Q3	Alkyl(C₁₂-C₂₂) trimethylben zylammonium bromide	西曲溴胺	4-51	0.1
Q4	2-[2-(3-Hep-tyl-4-methyl-2-thiazoline-2-yli-dene) methyne]-3-heptyl-4-methylthiazoli-nium ildide	磺化30庚基-2-(3-庚基-4-甲基-4-噻唑啉-2-亚基甲基)-4-甲基噻唑啉(KANKOH SO 201)	4-43	0.002
Q5	Diisobutylphe-noxyethoxyethyl-dimethyl-ben-zyla	苄索氯铵	4-41	0.1
M1	Benzyl alcohol	本甲醇	4-40	1
M2	Dodecylguanidine acetate	1-十二烷基呱乙酸盐	4-3	0.5 0.1
M3	2-Phenyoxye-thanol	2-苯氧基乙醇	4-37	1
M4	1-Phe-noxypropane-2-ol	1-苯氧基丙烷-乙醇	4-38	1

*序号为化妆品标准（GB 7916-87）中表四的序号。

* * （）内为欧共体1982最大允许用量，其他为我国标准（GB7916-87），有一个经上数字表示不同化妆品品种的用量不同详见标准（附录）

根据需要，按表2-3-25所示最大允许浓度称取适量标准，溶于95%乙醇中，但有以下例外：

表2-3-25 配制防腐剂标准溶液溶剂

防腐剂

溶剂

Aml，Am2，F5，F6，F7，F8，F9，Py3，Py4

M2，Ph2

Py5

Acl3，H4，H5，Py2

水

95%乙醇+水（1+1）

95%乙醇+1mol/LHCl（1+1）

氯仿

3.2 展开液

3.2.1 展开液1(MP1)⁽²⁾:将甲苯、戍烷和99.9%的乙酸按40+60+15比例混合。

3.2.2 展开液2(MP2)⁽³⁾:将甲苯、四氯化碳、乙酸乙酯和99.9%乙酸按40+30+20+5的比例混合。

3.2.3 展开液3(MP3)⁽⁴⁾:将95%乙醇、二甲基甲酰胺和99.9%乙酸按70+15+15的比例混合。

3.2.4 展开液4(MP4)⁽⁵⁾:将丙醇、水和99.9%乙酸按60+40+0.5比例混合。

3.3 显色剂⁽¹⁰⁾

3.3.1 显色剂R3⁽⁶⁾:由A和B组成,A是1%2-氯-4-硝基苯二叠氮苯-2-磺酸盐(2-chloro-4-nitrobenzenediazonium napthalene-2-sulfonate,简称NNCO,Fluka公司,商品号74150,或等效物)水溶液,用中速滤纸过滤后使用。用前配制。薄层板经A喷布后，风干1min，然后喷布B。B是10%（W/V）碳酸钠水溶液。

3.3.2 显色剂R4^（7）：由A、B二种溶液组成、A是0.1%（W/V）六氯铂酸的水溶液，B是1%（W/V）碘化钾水溶液。将A和B等量混合，此混合液可于暗处贮存一个月。在薄层板喷布显色剂R4后需立即观察。

3.3.3 显色剂R7⁽⁸⁾：由A和B组。A是2mol／L的氢氧化钠，B由0.2ml乙酰丙酮、0.3m1 99.9％乙酸、15g醋酸铵和50ml水组成，当天配制。薄层板喷布A后风干一分钟，喷布B，然后在100℃烘箱放置2min，于366nm下观察和记录。

3.3.4 显色剂R9⁽⁹⁾,称取1g香草醛（Vanillin）溶于98％硫酸，加98％硫酸使体积为100ml。薄层板喷布R9后，在100℃烘箱放置10min，观查和记录。

4 仪器

4.1 层析缸：带盖玻璃缸，双槽，Camag 25254或等效物。

4.2 高效薄层板

4.2.1 硅胶板： 10×20cm， Merck 5642或等效物。

4.2.2 反相硅胶板RP18：5×20或10×20cm， Merck l3724或等效物。

4.3可调波长的紫外光灯装置：可提供254nm和366nm波长。

5 分析步骤

5.1 样品预处理⁽¹¹⁾

5.1.1 含洒精的样品：可以直接用于测定。

5.1.2 气溶胶型样品：将样品喷入烧杯后，直接取样。

5.1.3 乳剂和膏霜类：称取2g样品分散在10ml 95％乙醇-水（50＋50）中，超声匀浆15min在5000r／min下离心10min，取上清液为待测样液。

5.1.4 凝胶类样品：同5.1.3，或取2g样品分散于10ml氯仿95％乙醇（50＋50）中，超声匀浆15min，5000r/min离心10min，取上清液为待测样液。

5.1.5 粉底霜：取2g样品分散于10ml无水乙醇中，其他步骤（匀浆、离心）同5.1.3。或则取lg样品与2g硅藻土545混合形成一松散的粉末，取内径为lcm的玻璃层析柱，底端用约10mg玻璃棉填塞，将样品粉装入柱内。每次约0.5g并用玻璃棒压紧。用25m1 95％乙醇-水（50＋50）洗脱，流速为1m1／min。必要时可在柱上加压。收集流出液于蒸发皿中，在水浴上蒸发至近干，加入5ml 95％乙醇。水（50＋50）溶解。

5.1.6 眼影和睫毛油：取2g样品溶于10ml无水乙醇中，其他步骤如匀浆、离心等同5.1.3。如效果不好，也可用硅藻土（见5.1.4）或95％乙醇-水（50＋50）（见5.1.3）浸提。

5.1.7 粉类样品：同5.1.5或5.1.4。

5.1.8 含腊质的捧状样品取2g样品溶于10ml氯仿，置于50℃水浴中并振摇，以保证溶解完全。

5.1.9 皂类：取2g的已粉碎皂类样品，分散于10ml无水乙醇中，其余匀浆等步骤同5.1.3。

5.2 防腐剂初筛

5.2.1 点样：用微量注射器或定量毛细管吸取5.0?1待测样液，分次点样于硅胶薄层板（4.2.1）上，每次约1?1。样点位置距底边lcm。两个样点相隔1.5cm。每个待测样同时制备4块板。

5.2.2 展开：分别向四个层析缸内的液槽注入20ml展开剂MP1、MP2、MP3、MP4（3.2），立即将已点样的薄层板放入液槽内，盖好缸盖⁽¹²⁾。，控制温度在20±1℃和相对湿度70％。当展开剂前沿前进约6cm后，取出薄层板，风干3Omin。

5.2.3 辨认

5.2.3.1 分别检查用展开剂MP1、MP2、MP3和MP4展开的薄板，用笔勾出显现的斑点轮廓，计算R_f 值并记录颜色特征。

5.2.3.2 将用MP1、MP2、MPs和MP4展开的薄层板，分别在254nm⁽¹³⁾和366nm⁽¹⁴⁾下检查。标出并计算斑点的 R_f ，记录荧光特征。

5.2.3.3 分别用R9、R3、R7和R4处理MP1、MP2、MP3和MP4展开的薄层板，计算色斑的R_f 值，记录颜色特征。

5.2.3.4 根据4块板上各斑点的R_f 值及显色前斑点颜色、254nm和366nm下荧光特征及显色斑点特征，对照表2-3-26所列各防腐剂的R_f 和色斑特征，可以初筛出存在于化妆品中防腐剂的种类^(15)(16)。

表2-3-26各防腐剂在四种展开体系和显色剂中的R_f 值和斑点特征

防腐剂代号①	初筛实验的R_f值及斑点特征												确认时的班点
	颜色②			MP1-R9		MP2-R3		MP3-R7		MP4-R4			R_f	颜色②	实验体系⑤
	目测	254	356	R_f	颜色②	R_f	颜色②	R_f	颜色②	R_f		颜色②	R_f	颜色②	实验体系⑤
AC1	-	V	-	0.60	-	0.57	-	0.98	-	0.93		-	-	-
AC2	-	V	-	0.25	-	0.50	OR	0.98	-	0.95		-	0.85	V	5.5.2
AC3	-	V	-	0.27	-	0.57	Y	0.98	-	0.95		-	0.70	V	5.5.2
AC4	-	V	-	0.30	-	0.57	Y	0.98	-	0.95		-	0.60	V	5.5.2
AC5	-	V	-	0.35	-	0.60	Y	0.98	-	0.95			0.50	V	5.5.2
AC6	-	V	-	0.40	-	0.60	-	0.98	-	0.95		-	0.40	V	5.5.2
AC7	-	V	-	0.40	-	0.60	-	0.98	-	0.95		-	0.40	V	5.5.2
AC8	-	V	-	0.35	-	0.60	Y	0.98	-	0.95		-	0.40	V	5.5.2
AC9	-	(V)^④	-	0.55	-	0.60	(OR)	0.90	-	0.90		-	-		-
AC10	-	B	(F)	0.55	(P)	0.57	OR	0.95	(F)	0.90		-	-		-
AC11	-	V	-	0.60	V	0.60	(OR)	0.98	-	0.93		-	-		-
AC12	-	-	-	0.60	P-V	0.60	-	0.98	-	0.95		-	-		-
AC13	-	V	-	0.60	BU	0.60-	OR	0.98	-	0.95		-	-		-
						0.75(t)
H1	-	(V)	-	0.60	-	0.77	OR	0.98	-	0.95		-	-		-
H2	-	-	-	0.50	G-B	0.55	-	0.98	-	0.95		-	0.25	G-B	5.5.3
H3	-	V	-	0.30	-	0.53	-	0.98	-	0.95		-	-		-
H4	-	V	-	0.30	-	0.53	(OR)	0.98	-	0.95		-	-		-
H5		(V)	-	0.60	-	0.80	OR	0.98	-	0.95		-	-		-
H6	-	(V)	-	0.35	-	0.55	-	0.98	-	0.95		-	-		-
H7	-	(V)	-	0.60	-	0.73	-	0.98	-	0.95	-		-		-
H8	-	V	-	0.60	-	0.85	R-B	0.98	-	0.95	-		-		-
H9	-	V	-	0.55	(P)	0.60	-	0.98	-	0.95	-		-		-
H10	-	V	-	0.30	(P)	0.65	OR	0.98	-	0.95	-		-		-
H11	-	(V)	-	0.70