5.1.1目的：确定受试物能否经皮肤渗透和短期作用所产生的毒性反应，并为确定亚慢性试验提供实验依据。

5.1.2定义：系指受试物涂敷皮肤一次剂量后所产生的不良反应。剂量表示方法：以敷用受试物的质量（g、mg）或以实验动物平均单位体重敷用受试物的质量（mg/kg）来表示。一次敷用受试物引起50％受试动物死亡的剂量，称之为半数致死量（LD50）。LD50值的单位为mg或g／kg体重。

5.1.3动物的准备：选用两种性别成年大鼠、豚鼠或家兔均可。建议试验起始动物体重范围为大鼠200～300g，豚鼠350～450g，家兔2.0～3.0kg。实验动物应在动物笼内观察3～5天，使其适应环境，并观察其健康状况，正式给药前24h，将动物背部脊柱两侧毛发剪掉或剃掉，注意不要擦伤皮肤，因为损伤能改变皮肤的渗透性，受试物涂抹处，不应少于动物体表面积的10％。各类动物体表面积计算方法见附录A。

5.1.4，受试物的配制：若受试物是固体，应磨成细粉状，并用适量水或无毒无刺激性赋形剂混匀，以保证受试物与皮肤良好的接触。常用的赋形剂有橄榄油，羊毛脂、凡士林等。若受试物是液体，一般不必稀释。

5.1.5剂量和分组：将两种性别的实验动物分别随机分为5～6组，若用赋形剂，需设赋形剂对照组。化学物质毒性的半数致死量（LD50）计算方法见附录B。机率单位－对数图解法，每组最好10只动物。各剂量组间要有适当的组距，以使各剂量组产生一系列的毒性反应或死亡率。最高剂量可达2000mg／kg。

5.1.6试验方法，将受试物均匀地涂敷于动物背部，并用油纸和两层纱布覆盖，再用无刺激性胶布或绷带加以固定，以防脱落和动物舔食受试物，共敷药24h。试验结束后，可用温水或适当的溶剂清除残留的受试物。一般观察一周，若给药4天后仍有动物死亡时，仍需继续观察一周。给药后注意观察动物的全身中毒表现和死亡情况，包括动物皮肤、毛发、眼睛和粘膜的变化，呼吸、循环、自主和中枢神经系统、四肢活动和行为方式等的变化，特别要注意观察震颤、惊厥、流涎、腹泻、嗜睡、昏迷等现象。凡是试验过程中死亡的动物和／或有毒性反应的动物，均应进行尸检和肉眼观察。当肉眼可见病变时，还应进行病理组织学镜检。

5.1.7结果评价：急性毒性升级标准详见附录C。