5.6.1试验方法的原则

5.6.1.1首选动物为白色豚鼠和白色家兔，每组动物8～10只。

5.6.1.2照射源一般采用治疗用汞石英灯，水冷式石英灯作光源，波长在280～320nm范围的中波紫外线或波长在320～400nm范围的长波紫外线。

5.6.1.3照射剂量按引起最小红斑量（MED）的照射时间和最适距离来控制。一般需做预备试验确定MED值。

5.6.1.4受试物浓度采用原液或按人类实际用浓度，光变态反应试验的激发接触浓度可采用适当的稀释浓度。采用无光感作用的丙酮或酒精作稀释剂。

5.6.1.5光变态反应试验需采用阳性对照，常用阳性光感物为四氧水杨酰替苯胺。

5.6.1.6光源照射前应使受试物有足够的时间穿透皮肤，一般大于30min，并确证受试物存留在皮肤内。

5.6.1.7如已证明受试物具有光毒性，可以不做光变态反应试验。

5.6.2皮肤光毒试验方法

5.6.2.1先将实验动物背部脊柱一侧的毛剪掉，去毛范围为3cm×8cm(见图2)。

5.6.2.2用中波紫外线灯照射去毛区，时间以秒为单位，分几档，测定MED。

5.6.2.3观察确定照射后8～12h引起一度红斑(刚刚可见)的照射时间为1个MED。

5.6.2.4

预试验3天后，用剪刀再将实验动物背部脊柱两侧去毛共四块，范围每块2cm×2(见图3)。

图 3

5.6.2.5将受试物0.05～0.lml（g）均匀涂在1、2脱毛区，并用黑纸覆盖避光。

5.6.2.6涂药30min后，第一脱毛区用亚MED的中波紫外线灯照射；第二脱毛区用黑纸覆盖不予照射；第三区仅用亚MED的中波紫外线照射，不涂药；第四区作空白对照，不给予任何处理。

5.6.2. 7照射后1、24和48h，观察皮肤反应，按裹6进行皮肤反应强度的评价。

5.6.2.8结果评价凡实验动物第一次与受试物接触，并在光能作用下引起类似晒斑的局部皮肤炎症反应，即可认为该受试物具有光毒作用。

5.6.5皮肤光变态反应试验

5.6.3.1诱导阶段：实验动物颈部用脱毛剂脱毛2cm×4cm，于脱毛区四角皮内注射福氏完全佐剂(FCA)各0.1ml(见图4)。

图 4

5.6.3.2于脱毛区涂20％十二烷基硫酸钠（SLS）溶液，再将受试物0.lml（g）涂在该脱毛部位。

5.6.3.3用波长在280～400nm的中长波紫外线灯照射涂药部位，距离和时间以产生明显红斑为准。中波紫外线的照射剂量为6.6J／cm²，长波紫外线为10J／cm²。

5.6.3.4隔日重复5.6.3.2及5.6.3.3步骤，共5次。

5.6.3.5激发阶段：于诱导操作后两周，将实验动物背部脊柱两侧脱毛1.5cm× 1.5cm／块，共4块（见图5）。

图 5

5.6.3.6第1块涂受试物0.lml后30min用长波紫外线照射；第2块涂受试物后用黑纸遮盖不照射；第3块不涂受试物，仅用长波紫外线照射；第4块用黑纸遮盖，不涂受试物，亦不照射。

5.6.3.7照射后24、48和72h，观察皮肤反应，按表5进行府肤反应强度评分。

5.6.3.8结果评价凡化学物质单独与皮肤接触无作用，经过激发接触和特定波长光照射后，局部皮肤出现红斑、水肿、甚而全身反应，而未照射部位无此反应者，可认为该受试物是光敏感物质。