5.11 慢性毒性试验

5.11.1目的：确定动物长期接触化学物质后所产生的危害。

5.11.2定义：系指动物长期接触受试物所引起的不良反应。

5.11.3动物的选择，一般建议两种哺乳动物，常用大鼠和小鼠。使用两种性别。试验开给时选用刚断乳的动物。

5.11.4剂量和分组：一般至少设三至四个剂量组和一个对照组。大鼠至少20只每组每性别，小鼠比大鼠适当增加数量。在慢性毒性试验中，最好要有剂量反应关系，最高剂量组应引起毒性反应或明确的损害作用，低剂量组不应引起毒性作用或有害影响。

5.11.5试验方法：慢性经口或皮肤毒性试验，分别采取相应的给药途径，具体方法参见相应的亚慢性毒性试验，试验期限至少为6个月，甚至一年。整个试验期间，对动物的一般观察、临床粒查和病理学检查，参见亚慢性毒性试验。除此而外，还有一些具体要求：

①在试验的头三个月，每周称重一次；在4～6个月期间，每两周称重一次，以后每周称重一次。

②在试验开始后的第三个月、第六个月和试验结束时，进行血液学和临床生化学有关指标的测定。一般从每组每种性别中沸10只动物进行测定。如果可能的话，最好每次血样来自相同的动物。

5.11.6

5.12 致癌试验

5.12.1

5.12.2

5.12.3动物的选择：建议对活性不明的化学物质采用两种动物，一般优先选用小鼠和大鼠，动物的敏感性对试验影响很大。一般来讲，用小鼠诱发肝癌比大鼠容易，相反地，诱发皮下肿瘤则大鼠比小鼠更容易。小鼠和兔子的皮肤对局部涂抹诱发肿瘤可能比大鼠和地鼠更为敏感。两种性别都应该使用，常使用刚断乳或已断乳动物进行致癌试验。

5.12.4剂量和分组：至少三个剂量组和一个对照组。最高剂量应以足以引起最低毒性反应，又没有因肿瘤以外的因素和明显改变其正常生命期限。这些毒性反应可能表现为血清酶水平的改变，或体重增加受到轻度抑制，（降低百分之十）。最低剂量应该不影响动物的正常生长、发育和寿命，即不能引起任何毒性表现。中间剂量应该处于最高和最低剂量的中间范围。每个剂量组和对照组的每种性别至少25～50只动物。试验期限：应该包括动物正常生命期的大部分时间。建议参考下面几条准则：① 一般情况，试验结束时间对小鼠和地鼠应为18个月，大鼠为24个月。② 当最低剂量组或对照组存活的动物数只有百分之二十五时，也可以结束试验。对于有明显性别差异的试验，则其结束的时间，不同的性别应有所不同。若高剂量组因明显的毒性作用造成过早死亡，此时不应结束试验。一个合格的阴性对照验应符合下列标准：① 因疾病、被同类吃掉，或因管理问题所造成的动物损失在任何组都不能高于百分之十。② 小鼠和地鼠在18个月，大鼠在24个月时，各组存活的动物不能少于50％。

5.12.5试验方法：给受试物的途径，根据受试物的理化特性和对人有代表性的接触方式（经口或皮肤涂抹）而定。整个致癌过程中，注意观察并记录动物出现的症状或死亡情况，尤其要注意肿瘤发生情况，每一个肉眼可见的或触及的肿瘤出现的时间、部位、大小、外形和发展情况都应记录。在实验过程中死亡或因处于垂死状态而被处死，以及试验结束时全部宰杀的动物，都应进行完整的大体尸检。所有动物的全部器宫和组织都应保留以进行镜检，但实际上是有困难的，只能有选择地进行，至少下述情况要进行镜检：① 各组所有肉眼可见的肿瘤或可疑肿瘤的病变。② 最高剂量组和对照组动物，以及试验过程中死亡或处死的所有动物所保留的器官和组织。详细描述增生、瘤前病变或肿瘤的形态学改变。③ 如果在最高剂量和对照组之间，增生、瘤前病变或肿瘤有明显区别，则应该对该试验各组所有动物的特殊有关的器官和组织进行镜检。④ 如果实验结果表明动物正常寿命有明显改变或产生了一些能影响肿瘤发生的作用，则下一个低剂量组动物也应按上述方式进行镜检。

5.12.6致癌试验结果的评价采用联合国世界卫生组织提出的四条判断诱癌试验阳性的标准：① 肿瘤只发生在试验组动物中，对照组无肿瘤。② 试验组与对照组动物均发生肿瘤，但试验组中发生率高。③ 试验组动物中多发性肿瘤明显，对照组中无多发性肿瘤或只少数动物有多发性肿瘤。④ 试验组与对照组动物肿瘤的发生率无明显差异，但试验组中肿瘤发生的时间较早。上述四条中，试验组与对照组之间的数据经统计学处理后任何一条有显著的差异时即可认为检品的诱癌试验属阳性。动物致癌试验为人体长期接触该物质是否引起肿瘤的可能性提供资料。