1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了无特定病原体（SPF）动物、无菌（GF）动物生活环境和粪便标本的检验方法。适用于SPF和GF小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、兔的检验。

2 引用标准

　　GB 4789.28　食品卫生微生物学检验　染色法、培养基和试剂

　　GB／T 14926.14　实验动物　金黄色葡萄球菌检验方法

　　GB／T 14926.17　实验动物　绿脓杆菌检验方法

3 材料和试剂

3.1 厌氧培养装置。

3.2 脑心浸液肉汤

3.2.1 成分

3.2.2 制法：溶解后调好pH值，121℃15min灭菌备用。

3.3 硫乙醇酸钠肉汤

3.3.1 成分

3.3.2 制法：溶解后调好pH值，121℃15min灭菌备用。

3.4 大豆蛋白胨肉汤

3.4.1 成分

3.4.2 制法：溶解后调好pH值，121℃15min灭菌备用。

3.5 血琼脂平板 GB 4789.28中3.6。

3.6 NAC液体及固体培养基 GB／T 14926.17中3.1及3.2。

3.7 7.5％氯化钠肉汤及高盐甘露醇平板 GB 4789.28中3.48及GB／T 14926 .14中3.4。

4 SPF动物生活环境和粪便标本的检验方法

4.1 标本采集 将SPF动物的新鲜粪便、饮水及垫料分别收集在无菌试管中，按程序从隔离器或SPF动物房中取出。

4.2 分离培养 标本分别接种NAC液体培养基和7.5％氯化钠肉汤，按国家标准中实验动物绿脓杆菌检验标准和金黄色葡萄球菌检验标准，分离培养绿脓杆菌和 金黄色葡萄球菌。

4.3 结果报告 凡绿脓杆菌或金黄色葡萄球菌分离阳性者，则认为其生活环境不符合SPF动物要求。

5 GF动物生活环境和粪便标本的检验方法（无菌试验方法）

5.1 标本采集 同3.1标本采集。其中粪便标本中加入适量无菌生理盐水制成粪悬液。

5.2 接种培养基　标本按下表所列项目接种培养基。接种后分别在3个温度下培养至少14天，观察有无细菌和真菌生长。在第7天和第14天，从37℃培养的两种液体培养基中转种血琼脂平板，再放37℃培养4天，观察平板上有无细菌生长。

无菌试验方法

　　注：●必须检查；○必要时检查。

5.3 结果报告 标本经4种培养基，3个温度培养18天，如未发现培养基混浊 和菌落生长，可报告标本无菌。