1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了弓形体（Toxoplasma gondii）的间接血凝（IHA） 检查方法。本方法适用于小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、兔等动物的检查。

2 主要试剂和器材

2.1 弓形体致敏绵羊红细胞。

2.2 正常对照绵羊红细胞。

2.3 阳性对照血清。

2.4 阴性对照血清。

2.5 稀释液　含1％健康兔血清的磷酸缓冲液。

2.6 微量血凝试验反应板。

2.7 微量加样器。

2.8 无菌试管、吸管。

2.9 震荡器和冰箱。

3 检验步骤（IHA法）

3.1 取样　无菌手续采血约1mL（小鼠、大鼠、地鼠眼部采血；豚鼠心脏采血；兔耳缘采血），斜放待凝，4℃冰箱中过夜。

3.2 分离血清 无菌手续将冰箱中过夜后的血样管中的血清轻轻吸到另一无菌试管中。

3.3 灭活血清 将分离出的血清，置56℃恒温水浴中灭活30min。

3.4 正式试验　以稀释液、采取对倍稀释法、在微量反应板中，依次逐一对每份血清进行稀释，每份血清稀释两横排，每孔最后留量为0.025mL，设阳性血清、阴性血清、空白对照各一孔。第一横排滴加弓形体致敏绵羊红细胞0.025mL，第二横排滴加正常对照绵羊红细胞0.025mL。然后将加好样品的微量反应板置震荡器上震荡3～5min，使抗原抗体充分混合，15～28℃室温下过夜后判定结果。

4 判定标准

4.1 红细胞呈膜状均匀沉于孔底，中央无沉点或沉点小如针尖，判为“＋＋＋＋” 。

4.2 红细胞虽呈膜状沉着，但颗粒较粗，中央沉点较大，判为“＋＋＋”。

4.3 红细胞部分呈膜状沉着，周围有凝集团点，中央沉点大，判为“＋＋”。

4.4 红细胞沉集于中心，周围有少量颗粒状沉着物，判为“＋”。

4.5 红细胞沉集于中心，周围无沉着物，分界清楚，判为“－”。

　　以出现“＋＋ ”孔的血清最高稀释倍数定为本间接血凝试验的凝集效价。小于或等于1∶16判为阴性；1∶32判为可疑；等于或大于1∶64判为阳性。

5 结果报告

　　根据判定标准，及时作出报告。

6 注意事项

6.1 每份血清专管专用，严禁混淆。

6.2 滴加抗原时，从血清低浓度至高浓度加起，沿孔壁缓缓加入，先加对照孔，再加试验孔，严禁管头接触孔底血清。

6.3 用于稀释液中的健康兔血清，用前要56℃、30min水浴灭活，经血清吸收试验、弓形体间接血凝试验后方能使用。

6.4 被检血清样品，如出现非特异凝集现象，要做血清吸收试验后，重新做间接血凝试验判定效价。