1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了大鼠细小病毒（RV 和 H-1株）抗体的检验方法、试剂等。适用于检测实验大鼠群的大鼠细小病毒（RV 和H-1株）感染情况。

2 引用标准

　　GB／T 14926.18　实验动物　淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒检验方法

　　GB／T 14926.24　实验动物　小鼠肺炎病毒检验方法

3 设备、材料和试剂

3.1 大鼠细小病毒RV株毒种。

3.2 大鼠细小病毒H-1株毒种。

3.3 SPF大鼠胚细胞，原代至第5代。

3.4 1.5％豚鼠红细胞。

3.5 HI、IFA和IEA所需要的设备、材料和试剂见GB／T 14926.24中5.3 和 GB／T 14926.18中4.2。

4 检验步骤

4.1 血凝素抗原制备：RV和H-1毒种各接种大鼠胚细胞，培养7～12天，细胞病变达“＋＋＋～＋＋＋＋”，血凝素滴度达1∶320以上，收获培养物，2000r／min20min离心去碎片，取上清经滴定，分装保存于低温（GB／T 14926.24中5.3）。

4.2 玻片抗原制备：RV和H-1毒种各接种大鼠胚细胞，培养7～12天，病变达“ ＋＋～＋＋＋”涂片（RV 和H-1以及正常细胞可涂于一张玻片上，方便使用）。涂片、鉴定和保存见GB／T 14926.18中4.2.3。

4.3 阳性血清：RV和H-1毒种分别免疫SPF大鼠的阳性血清。HI滴度≥1∶160， IFA或IEA 滴度≥1∶160。

4.4 阴性血清：确证无RV和H-I病毒感染的SPF大鼠群血清。

5 检验方法和结果判定

5.1 HI法：是首选的方法，RV和H-I分别检查。待检血清加霍乱滤液处理，如有非特异性凝集索，加豚鼠红细胞吸附去除。试验用8个血凝素单位，与待检血清室温作用30min，加入1.5％豚鼠红细胞置室温40min读取结果。抗体滴度≥1∶20判阳性。阳性标本经重试仍为阳性确定为阳性。具体操作方法见GB／T 14926.24中5.3。

5.2 IFA和IEA法：亦可使用，用RV和H-1玻片抗原，用抗大鼠IgG荧光结合物（作IFA）或抗大鼠IgG酶结合物（作IEA）。操作步骤和结果判定见GB／T 14926.18中4.2.4。待检血清1∶5阳性经重试仍为阳性判阳性。

6 结果报告

　　根据结果判定作出报告。