1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了小鼠多瘤病毒（以下简称PyV）的检验方法、试剂等，适用于检测实验小鼠群的PyV病毒的感染情况。

2 引用标准

　　GB/T 14926.18　实验动物　淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒检验方法

　　GB/T 14926.24　实验动物　小鼠肺炎病毒检验方法

3 材料和试剂

3.1 PyV病毒毒种。

3.2 SPF小鼠胚原代细胞。

3.3 豚鼠红细胞。

3.4 酶标仪。

3.5 荧光显微镜。

3.6 离心机。

4 检验步骤

4.1 制备ELISA抗原：将Py病毒接种原代鼠胚细胞，每隔3～4天更换维持液，约10～14天，当细胞病变（CPE）达到＋＋＋时收获，抗原处理方法见GB/T 14926.18中4.1. 2.2。

4.2 制备玻片抗原：同上述ELISA抗原，当CPE达＋＋时涂片，涂片方法，抗原的鉴定和保存见
GB/T 14926.18中4.2.3。

4.3 制备PyV阳性血清：用Py病毒抗原免疫SPF小鼠。

4.4 制备Py阴性血清：采集无Py病毒感染的血清，作为阴性血清。

4.5 制备PyV血凝素抗原：Py病毒接种原代鼠胚细胞，每隔3～4天更换一次维持液，约10～14天，当CPE达＋＋＋收获，冻融三次，低速离心取上清液即可。

5 检验方法和结果判定

5.1 HI法，见GB/T 14926.24中5.3使用16个血凝单位，放置4℃1h，1∶20阳性判为阳性。

5.2 IFA法，见GB/T 14926.18中4.2。

5.3 ELISA法，见GB/T 14926.18中4.1。

5.4 IEA法，见GB/T 14926.18中4.2。

　　当检样出现阳性时，选用同一种方法或另一种方法重试。如为阳性则判为阳性结果。

6 结果报告

　　根据判定结果，作出报告。