1 主题内容与适用范围
本标准规定了小鼠腺病毒抗体的检验方法,试剂等。适用于检测实验小鼠群的小鼠腺病毒感染情况。
2 引用标准
GB/T 14926.18 实验动物 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒检验方法。
3 设备、材料和试剂
3.1 小鼠腺病毒(MAd)毒种、FL株。
3.2 小鼠肾原代细胞。
3.3 ELISA、IFA和IEA所需的设备、材料和试剂等见GB/T
14926.18中4.1和 4.2。
4 检验步骤
4.1 玻片抗原的制备:MAd FL株毒种接种小鼠肾原代细胞,约2~4天,细胞病变达“++~+++”时涂片。涂片、鉴定和保存见GB/T
14926.18中4.2.3。
4.2 ELISA 抗原的制备:MAd FL株毒种接种小鼠肾原代细胞,细胞病变达“
+++~++++”时
收毒,冻融3次,离心3000r/min,取上清,超速离心后收集沉淀物,滴定抗原效价,分装保存(见
GB/T 14926.18中4.1.2.2)。
4.3 阳性血清:MAd FL株毒种免疫SPF小鼠的阳性血清或免疫腹水,ELISA滴度≥1∶1
280,IFA和IEA滴度≥1:160。
4.4 阴性血清:确证无MAd感染的SPF小鼠群血清。
5 检验方法和结果判定
5.1 ELISA法:是首选的方法,使用MAd ELISA抗原,酶结合物用抗小鼠IgG酶结合物或SPA-酶结合物均可。操作步骤和结果判定见GB/T
14926.18中4.1.3。待检 血清1∶10阳性,经重试或用IFA重试仍为阳性判阳性。
5.2 IFA或IEA法:亦可使用,用MAd FL株玻片抗原,抗小鼠IgG荧光结合物(作IFA)和SPA-酶结合物(作IEA),操作步骤和结果判定见GB/T
14926.18中4.2.4。待检 血清1∶5阳性经重试(本法或另一法)仍为阳性判阳性。
6 结果报告
根据结果作出报告。
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