1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了小鼠脑脊髓炎病毒（以下简称TMEV）的检验方法、试剂等，适用于检测实验小鼠TMEV病毒的感染情况。

2 引用标准

　　GB／T 14926.18　实验动物　淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒检验方法

　　GB／T 14926.24　实验动物　小鼠肺炎病毒检验方法

3 材料和试剂

3.1 TMEV毒种：GDVII毒株。

3.2 BHK21传代细胞。

3.3 人“O”型红细胞。

3.4 酶标仪。

4 检验步骤

4.1 制备ELISA 抗原：取GDVII感染发病小鼠的脑，研磨，制成10％悬液，3000r／min离心10min，取上清液接种于长成致密单层的BHK21细胞，吸附1.5～2h，加维持液培养5天左右，当细胞病变（CPE）达到＋＋～＋＋＋时收获，浓缩提纯抗原方法见 GB／T 14926.18中4.1.2.2。

4.2 制备IFA，IEA抗原片：将GDVII病毒感染BHK21细胞，培养5天，涂片，涂片程序，抗原的鉴定和保存见 GB／T 14926.18中4.2.3。

4.3 制备GDVII免疫血清：取清洁鼠或SPF级小鼠腹腔注射GDVII鼠脑病毒液（血凝素的滴度为1∶1024），每次0.05mL／只，每周一次，连续三周，最后一次免疫的同时，腹腔注射0.2mL180实体瘤细胞，7～10天搜集腹水和血液。

4.4 制备GDVII阴性血清：采集无GDVII病毒感染的小鼠群血清，为阴性小鼠群血清。

4.5 制备GDVII血凝素抗原：取感染GDVII病毒发病鼠的鼠脑，用2％牛血清白蛋白的Eagle′s液作成10％悬液，冻融两次，3000r／min离心10min，取上清液，与0.5％胰酶胺1∶1比例混合后即为血凝素抗原。

5 检验方法和结果判定

5.1 间接ELISA法见GB／T 14926.18中4.1。

5.2 IFA法，见GB／T 14926.18中4.2。

5.3 IEA法，见GB／T 14926.18中4.2。

5.4 HI法：用8单位血凝素抗原，待与被检血清混合置4℃作用1h后，再加入0.5％人“O”型血细胞，置于
4℃冰箱，1h后读取结果，待检样品HI滴度≥1∶20判为阳 性（见GB／T 14926.24中5.3）。当检样出现阳
性时，选用同一种方法或另一种方法重试。如为阳性则判为阳性结果。

6 结果报告

　　根据判定结果，作出报告。