1 主题内容与适用范围
本标准规定了呼肠孤病毒Ⅲ型抗体的检测方法，试剂等。适用于检测实验小鼠、大鼠、地鼠和豚鼠群的呼肠孤病毒Ⅲ型感染情况。
2 引用标准
GB/T 14926.18 实验动物 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒检验方法
3 设备、材料和试剂
3.1 呼肠孤病毒Ⅲ型（Reo-3）毒种。
3.2 BHK-21细胞系。
3.3 ELISA、IFA和IEA方法所需的设备、材料和试剂见
GB／T 14926.18中4.1和4.2。
4 检验步骤
4.1 玻片抗原的制备：Reo-3毒种接种BHK-21细胞，置37℃温箱3～4天，细胞病变达“＋＋～＋＋＋”时涂片。涂片、鉴定和保存见
GB／T 14926.18中4.2.3。
4.2 ELISA抗原的制备：Reo-3病毒液接种BHK-21细胞，置37℃温箱3～5天，细胞病变达“＋＋
＋～＋＋＋＋”时收获培养物，冻融3次，超速离心收集沉淀物，作为抗原。抗原的滴定、分装
和保存见GB／T 14926.18中4.1.2.2。
4.3 阳性血清制备：Reo-3病毒液免疫SPF小鼠、大鼠、地鼠和豚鼠的阳性血清，ELISA滴度≥1∶1280，IFA和IEA滴度≥1∶160。
4.4 阴性血清：确证无Reo-3感染的SPF小鼠和大鼠以及地鼠和豚鼠的血清。
5 检验方法和结果判定
5.1 ELISA法：为首选的方法，使用Reo-3 ELISA抗原，根据待检血清的动物种属采用相应的酶结合物。操作步骤和结果判定见
GB／T 14926.18中4.1.3。待检血 清1∶40阳性，经重试或用IFA重试仍为阳性判阳性。
5.2 IFA或IEA法：亦可使用，用Reo-3玻片抗原。根据待检血清的动物种属采用相应的荧光或酶结合物。操作步骤和结果判定见
GB/T 14926.18中4.2.4。待检 血清1∶5阳性，经重试为阳性判阳性。
6 结果报告
根据结果判定作出报告。
|
