1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了鼠痘病毒的检验方法、试剂等，适用于检测实验小鼠群中鼠痘病毒的感染情况。

2 引用标准

　　GB／T 14926.18　实验动物　淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒检验方法

3 设备、材料和试剂

3.1 痘苗病毒毒种。

3.2 BHK-21 传代细胞，Vero传代细胞。

3.3 酶标仪。

3.4 生物显微镜。

3.5 恒温培养箱。

3.6 离心机4000r/min。

3.7 微量加样器。

3.8 聚苯乙烯板。

3.9 冰箱4℃，－20℃。

4 检验步骤

4.1 痘苗病毒ELISA抗原制备：将痘苗病毒接种BHK-21传代细胞，待细胞病变达＋＋＋－＋＋＋＋时，收获病毒，将病毒液冻化三次，2000r／min离心20min，将上清液装入透析袋，用聚乙二醇（分子量20000）脱水浓缩5～10倍，低温保存。

4.2 痘苗病毒抗原片制备：将痘苗病毒接种Vero细胞，待细胞病变达＋＋－＋＋＋时，将感染细胞制成抗原片。

4.3 阳性血清　用痘苗病毒免疫SPF小鼠，制成阳性血清。

4.4 阴性血清 确证无鼠痘病毒感染的SPF小鼠血清。

5 检验方法

5.1 采用ELISA（见GB/T 14926.18中4.1）方法或IEA（见GB/T 14926.18中4.2）方法进行血清学检验。

5.2 当标本出现阳性结果时，则选用同一方法或另一方法重试，结果阳性则判为阳性，对疑鼠痘病鼠，可进行病毒检查，取病鼠脾脏，制成10％悬液，3000r/min离心30min，取上清接种BHK－21细胞或Vero细胞，如出现病变，同上法制成抗原片，用痘苗病毒阳性血清进行特异性鉴定。

6 结果报告

　　根据判定结果做出报告。