1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了实验动物绿脓杆菌的检验方法。适用于大鼠、小鼠、豚鼠、地鼠和兔的检验。

2 引用标准

　　GB 4789.28　食品卫生微生物学检验　染色法、培养基和试剂

　　GB/T 14926.5　实验动物　多杀巴氏杆菌检验方法

3 材料和试剂

3.1 NAC增菌液

3.1.1 成分

3.1.2 制法：除16烷外，将上述成分溶解，加5N NaOH调pH7.4～7.5后，加入16烷溶解后按需分装，121℃灭菌1min即可。

3.2 NAC琼脂

3.2.1 成分

3.2.2 制法：将琼脂加入NAC液体培养基中，121℃灭菌1min，冷至50～55℃，倾注平皿。

3.3 营养琼脂 GB 4789.28中3.7。

3.4 伊红美蓝琼脂（EMB） GB 4789.28中3.23。

3.5 三糖铁琼脂 GB 4789.28中3.24。

3.6 糖发酵管 GB 4789.28中2.2。

3.7 半固体琼脂 GB 4789.28中3.28。

3.8 营养明胶 GB 4789.28中2.10。

3.9 尿素培养基 GB／T 14926.5中3.7。

3.10 蛋白胨水 GB 4789.28中2.13。

3.11 硝酸盐培养基 GB 4789.28中2.17。

3.12 氧化酶试验 GB 4789.28中2.18。

4 检验程序

5 检验步骤

5.1 采样：采取回盲部内容物，伤口分泌物。

5.2 分离培养：检样接种NAC增菌液，置36±1℃培养18～24h后，取增菌液接种NAC或EMB琼脂平皿，
36±1℃培养18～24h。本菌在液体培养基中生长迅速，均匀混浊，表面形成菌膜，产生水溶性绿脓
菌素。在NAC平皿上菌落扁平，边缘不整齐，大小不一，表面湿润，有光泽，菌落周围有蓝绿色或
褐色色素扩散，但亦有不产生色素的菌 株。取可疑菌落纯培养。

5.3 染色镜检：绿脓杆菌为革兰氏阴性小杆菌，菌体长短不一，呈多形性排列。鞭毛染色，可见菌体一端有一根鞭毛。

5.4 氧化酶试验：取一小块白色洁净滤纸片，以灭菌玻璃棒沾取可疑菌纯培养物涂于其上，随即滴加一滴新配制的1％盐酸二甲基对苯二胺试剂，30s内滤纸片上培养物呈现粉红色，逐渐变成紫红色，即为氧化酶试验阳性。若培养物不变色，氧化酶试验为阴性，可报告绿脓杆菌阴性。

　　根据被检菌为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性及产生蓝绿色色素，可报告检出绿脓杆菌。

5.5 生化试验：对不产生绿脓菌素的菌株进一步作生化鉴定，其生化特性见下表：

绿脓杆菌的主要生化特性

　　+：阳性；－：阴性；＋／－：大部分菌株阳性。

5.6 血清学试验：除生化鉴定外，必要时可进行血清型鉴定。国内成都生物制品研究所有绿脓杆菌因子血清供应。

6 结果报告

　　综合以上生物学特性，生化试验结果，符合本菌要求作出阳性报告，不符合要求，作出阴性报告。