1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了肺炎链球菌检验，适用于实验小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠和兔的检验。

2 引用标准

　　GB 4789.28　食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂

3 材料和试剂

3.1 血琼脂 GB 4789.28中3.6。

3.2 葡萄糖肉浸液肉汤

3.2.1 成分

3.2.2 制法：上述各成分混合，加热溶解，调pH7.6，分装中试管，每管10mL，115℃ 15min灭菌备用。

3.3 革兰氏染色法　GB 4789.28中1.2。

3.4 荚膜染色

3.4.1 成分

　　取一定量印度墨汁，按2％加入甲醛，混合备用。

　　革兰氏染色液复染用石炭酸复红液。

3.4.2 染色法

　　将培养于血清肉汤中的细菌取一白金环放载物玻片上，然后取一白金环2％甲醛印度墨汁与其混合，推成薄片，自然干燥，火焰固定。

　　滴加碳酸复红液，染色30s，吸去多余液体，干燥，油镜观察。

3.5 10％去氧胆酸钠溶液

3.5.1 成分

3.5.2 制法：溶解即可。

4 检验程序

5 操作步骤

5.1 采样，采取气管分泌物或病灶标本。

5.2 分离培养：检样用接种环直接分离于血琼脂平皿上36±1℃，10％CO₂，下培养24h；同时接种葡萄糖肉浸液肉汤，同上培养和分离。然后挑起可疑菌落。其菌落形态为圆形、扁平，似子母扣样，其周围有狭窄草绿色溶血环（a溶血）。挑取后分纯于血平皿上，以备进一步鉴定。

5.3 鉴定试验

5.3.1 革兰氏染色：肺炎链球菌为革兰氏阳性双球菌，钝头相对，尖头相背，似矛头状；有时呈短链排列。

5.3.2 荚膜染色，印度墨汁染色法。鉴定菌株，接种兔血清肉汤中，36±1℃温箱培养12h。取其一环滴于载玻片上的一端，另取一环2％福尔马林印度墨汁，与菌液混合，推成薄片，自然干燥，火焰固定，再加革兰氏染色液中的石碳酸复红染液，染色30s，吸取多余液体，使其干燥，油浸镜检。背景呈黑色，菌体染成红色，其周围有一较宽的无色透明环，即荚膜染色阳性。

5.3.3 胆盐溶解试验，取上述培养物1mL，加入10％去氧胆酸钠3～4滴（0.2mL），放室温5、10、30min观察结果。肺炎链球菌可被溶解。

5.3.4 肺炎链球菌和甲型链球菌的鉴别，见下表。

肺炎链球菌和甲型链球菌的鉴别

6 报告结果

　　凡符合上述各项实验结果，均可发出报告。否则可报告阴性。