| 食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验 |
| GB/T 4789.14—1994 |
1 主题内容与适用范围
本标准规定了蜡样芽胞杆菌的检验方法。
本标准适用于食品和食物中毒样品中蜡样芽胞杆菌的检验。
2 引用标准
GB 4789.2 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定
GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂
3 设备和材料
3.1 温箱：36±1℃。
3.2 普通冰箱。
3.3 显微镜。
3.4 恒温水浴46±1℃。
3.5 天平。
3.6 电炉。
3.7 吸管：1mL，10mL。
3.8 载玻片。
3.9 均质器或乳钵。
3.10 L型涂布棒。
3.11 灭菌刀，剪，镊子。
3.12 三角瓶：容量500mL。
4 培养基和试剂
4.1 肉浸液肉汤培养基：GB 4789.28中4.1。
4.2 酪蛋白琼脂培养基：GB 4789.28中4.65。
4.3 动力－硝酸盐培养基：GB 4789.28中4.72。
4.4 缓冲葡萄糖蛋白胨水：GB 4789.28中3.4。
4.5 血琼脂培养基：GB 4789.28中4.6。
4.6 3%过氧化氢溶液。
4.7 甲萘胺－乙酸溶液。
4.8 对氨基苯碘酸－乙酸溶液。
4.9 革兰氏染色液：GB 4789.28中2.2。
4.10 甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基：GB
4789.28中4.64。
4.11 0.5%碱性复红染色液：GB 4789.28中2.8。
4.12 木糖－明胶培养基：GB 4789.28中4.66。
5 检验程序
蜡样芽胞杆菌检验程序如下：
（图略）
6 操作步骤
6.1 菌数测定
以无菌操作将检样25g(mL)(按GB 4789.2测定)，用灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液做成10－1～10－5的稀释液。取各稀释液0.1mL，接种在两个选择性培养基——甘露醇卵黄多粘菌素(MYP)琼脂培养基上，用L形棒涂布于整个表面，置36±1℃温箱培养12～20h后选取适当菌落数的平板进行计数，蜡样芽胞杆菌在此培养基上的菌落为粉红色(表示不发酵甘露醇)，周围有粉红色的晕(表示产生卵磷脂酶)。计算后，从中挑取5个此种菌落做证实试验。根据证实为蜡样芽胞杆菌的菌落数计算出该平板上的菌落数，然后乘其稀释倍数，即得每克(或毫升)样品中所含蜡样芽胞杆菌数，例如MYP平板的可疑菌落为25个，取5个鉴定，证实为4个，乘上稀释倍数(如104)，再乘上1g(或mL)检样数(取的是0.1mL样)则为：
25×4/5×104×10＝2×106
6.2 分离培养
取检样或稀释液划线分离培养于选择性培养基(MYP)上，置37℃培养12～20h，挑取可疑的蜡样芽胞杆菌菌落(见6.1)接种于肉汤和营养琼脂做成纯培养，然后做证实试验。
6.3 证实试验
6.3.1 形态观察
本菌为革兰氏阳性大杆菌，宽度在1µm或1µm以上，芽胞呈卵圆形，不突出菌体，多位于菌体中央或稍偏于一端。
6.3.2 培养特性
本菌在肉汤中生长混浊，常微有菌膜或壁环，振摇易乳化；在普通琼脂平板上生成的菌落不透明、表面粗糙、似毛玻璃状或融蜡状，边缘不齐。
6.3.3 生化性状及生化分型
6.3.3.1 生化性状
本菌有动力：能产生卵磷脂酶和酪蛋白酶；过氧化氢酶试验阳性；溶血；不发酵甘露醇和木糖；常能液化明胶和使硝酸盐还原；在厌氧条件下能发酵葡萄糖。
6.3.3.2 生化分型
蜡样芽胣杆菌可根据对柠檬酸盐利用、硝酸盐还原、淀粉水解、V－P反应、明胶液化性状的试验，将该菌分成不同的型别，见表1。
表1 蜡样芽胞杆菌生化分型
（图略）
6.3.4 与类似菌鉴别
本菌与其他类似菌的鉴别见表2。
表2 蜡样芽胞杆菌与其他类似菌的鉴别
（图略）
续表 2
（图略）
本菌在生化性状上与苏云菌芽胞杆菌极为相似，但后者可籍细胞内产生蛋白质毒素结晶加以鉴别。其检查方法如下：取营养琼脂上纯培养物少许，加少量蒸馏水涂于玻片上，待自然干燥后用弱火焰固定，加甲醇于玻片上，半分钟后倾去甲醇，置火焰上干燥，然后滴加0.5%碱性复红液，并用酒精灯加热至微见蒸气维持1.5min，移去酒精灯，将玻片放置半分钟，倾去染液，置洁净自来水充分漂洗，晾干，镜检，在油浸镜下检查有无游离芽胞和深染的似菱形的红色结晶小体(如未形成游离芽胞，培养物应放室温再保存1～2d后再检查)，如有即为苏云金芽胞杆菌，蜡样芽胞杆菌检查为阴性。
附加说明：
本标准由卫生部卫生监督司提出。
本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。
本标准主要起草人白竟玉。 |
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