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(P86)
用于蛋白和多肽分析的SEC/GFC和DEAE柱
2 超纯刚性的硅胶基体极好的机械强度；
2 TSKTMSW产品的极好替代柱；
2 不仅对蛋白质和生物活性物质检测灵敏，分离好，而且回收率也很高；
2 柱子易于清洗和再生；
2 产品规模满足普通分析、快速分析和制备等的各种需要；
Biosep-SEC-S是一种非常高效的硅基凝胶过滤柱，用于蛋白质和多肽分离。其键合于刚性球形硅胶的亲水性官能团具有吸收率低，回收率高的特点。另外，严格的粒径筛选更稳定了BioSepTM产品的体积排阻性能。
交叉参考表
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BioSep
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Tosoh
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BioRad
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Aglient Technologies
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SEC-S2000
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TSK G2000 SW
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Bio-Sil SEC 125
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Zorbax GF-250
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SEC-S3000
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TSK G3000 SW
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Bio-Sil SEC 250
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Zorbax GF-450
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SEC-S4000
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TSK G4000 SW
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Bio-Sil SEC 400
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柱效
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BioSep-SEC-S2000 > 70,000 plates/meter
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BioSep-SEC-S3000 > 65,000 plates/meter
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BioSep-SEC-S4000 > 60,000 plates/meter
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样品回收和样品活性保留
BioSep-SEC-S对蛋白质的吸附非常小，因此能够获得很高的样品回收率，并且样品也不会因为作用而失活。用BioSep-SEC-S柱对胰蛋白酶的回收情况见下图所示。
用BioSep柱对胰蛋白酶的分离回收
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柱子型号
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PH值
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蛋白含量%*
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活性%
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BioSep-SEC-S2000
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3.0
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85-100
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86-100
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7.0
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70-79
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95-100
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BioSep-SEC-S3000
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3.0
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98-101
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96-100
|
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7.0
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70-78
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96-100
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BioSep-SEC-S4000
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3.0
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92-100
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95-100
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7.0
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69-80
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94-100
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*五次重复进样
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高离子强度
为了提高对样品的排阻作用，抑制其它干扰排阻效应的副作用，分离应用中要经常调整流动相的离子强度。增加流动相的粒子强度时，样品与填料间的疏水作用被加强，样品与填料间的粒子作用的动力条件得以改善。BioSepTM SEC系列产品使用于高盐浓度的分离条件下，在广泛的离子强度环境中均表现稳定，而且高的官能团键合率，消灭了硅胶基体表面的硅醇基活性中心，降低了非排阻作用。
溶菌酶是一种疏水性的蛋白质，能被用来测试SEC柱的表面活性。下图表示PH值变化时，溶菌酶KD值的相应改变。
(p86 f1) pH对于溶菌酶的分配系数KD的影响
色谱柱：BioSep-SEC-S2000,BioSep-SEC-S3000,BioSep-SEC-S4000
规格：300×7.8mm
流动相：100mM磷酸盐缓冲液（pH 3.0~7.0）
流速：1.0mL/min
检测：紫外@280nm
进样量：20?L
样品：10mg/mL溶菌素
Picture
KD由如下公式求算：
KD =（Ve-Vo）/（VT-Vo）
Ve：样品的稀释体积
VT：洗脱液体积
Vo：色谱柱的死体积
(P87)
高键载量
BioSep-SEC产品可以忍受很高的负荷强度，所以能够用于半制备和制备生产中的蛋白纯化。在实际应用中，溶解样品和提升柱温都有助于完成高负荷时的样品分离，但是，当对被分离后的蛋白质的活性要求挑剔时，上述手段不推荐使用。
(p87 f1) BioSep-SEC-S3000的柱容量
色谱柱：BioSep-SEC-S3000
规格：300×7.8mm
流动相：20mM磷酸钾缓冲液（pH 7.0）
流速：1.0mL/min
检测：紫外@280nm
进样量：100µL，含量由2mg至16mg
样品：免疫球蛋白M
免疫球蛋白A
免疫球蛋白E
Picture
(图中纵坐标) 分离度 (图中纵坐标) 进样量，mg免疫球蛋白/100?L
极好的稳定性
BioSep-SEC-S柱有较长的寿命，这是由于填料的化学稳定性很好。用PH值3.0左右的磷酸缓冲盐可以轻易的洗脱被吸附的蛋白质，保留较强的蛋白质则可以用乙腈或甲醇洗脱。
柱再生
当BioSep-SEC-S柱在应用蛋白变性试剂后，只要简单用纯水冲洗，就可以重新使用正常的流动相分离新的样品或贮藏。
可分离的分子量范围宽
下图指示了BioSep-SEC-S2000对于872-300,000 Doltons的蛋白质混合物的分离的标准曲线。图中用重均分子量的对数值对KD取点作图的线性相关系数在0.994。当线性关联度越高时，对未知蛋白质的计算越准确。
(p87 f2) BioSep-SEC-S2000对于蛋白质和多肽的体积排阻作用实验
色谱柱：BioSep-SEC-S2000
规格：300×7.8mm
流动相：50mM 磷酸盐缓冲溶液 pH6.8
流速：1.0mL/min
检测：紫外@215nm
进样量：10?L
样品：蛋白质+合成肽
1. 免疫球蛋白A (300,000)
2. 免疫球蛋白G (150,000)
3. 卵白蛋白 (44,000)
4. 胰蛋白酶抑制剂 (20,000)
5. 肽+5 (3,897)
6. 肽+4 (3,129)
7. 肽+3 (2,326)
8. 肽+2 (1,595)
9. 肽+1 (827)
Picture
(P88)
用BioSep-SEC-S3000分离蛋白
混合蛋白用体积排阻色谱BioSep-SEC-S3000进行分离：取2mg蛋白溶解在0.5mL的流动相缓冲液中(50mM的磷酸二氢钠，调节PH值到6.8)，取20uL注射到柱子中进行分析。
(p88 f1) BioSep-SEC-S3000对于蛋白质的体积排阻作用的实验
色谱柱：BioSep-SEC-S3000
规格：600×7.8mm
流动相：50mM 磷酸二氢钠缓冲溶液 pH6.8
流速：0.5mL/min
检测：紫外@280nm
进样量：20?L
样品：蛋白质混合物
1. 甲状腺球蛋白 (670,000)
2. 免疫球蛋白A (300,000)
3. 免疫球蛋白G (150,000)
4. LDH血清乳酸脱氢酶 (143,000)
5. 淀粉磷解酶b (97,000)
6. 牛血清白蛋白BSA (68,000)
7. 卵白蛋白 (44,000)
8. 辣根过氧化酶HRP (40,000)
9. 碳酸酐酶 (30,000)
10. 胰蛋白酶抑制剂 (20,100)
11. 肌红蛋白 (17,000)
12. 溶菌酶 (14,400)
13. 胰岛素 (5,700)
14. VB12 (1,350)
Picture
用BioSep-SEC-S4000分离葡聚糖类
分子量分布在6,000到2,000,000的葡聚糖类可以由BioSep-SEC-S4000柱子进行分离。重均分子量对数值和KD的关系显示了一条线性关系极好的直线（相关系数R2=0.993）。
(p88 f2) BioSep-SEC-S4000对于葡聚糖的体积排阻作用
色谱柱：BioSep-SEC-S4000
规格：300×7.8mm
流动相：水
流速：1.0mL/min
检测：示差
进样量：10?L
样品：葡聚糖
1. 2×7.8 6
2. 500,000
3. 110,000
4. 70,000
5. 40,000
6. 6,000
Picture
(p89 f1) 活性肽的分析
色谱柱：BioSep-SEC-S2000
规格：300×7.8mm
流动相：50mM磷酸盐缓冲液 pH6.8
流速：1.0mL/min
检测：紫外@215nm
进样量：10?L
样品：1. 抑肽酶 (6,512)
2. 血管紧张肽 (1,296)
3. 脑菲肽 (555)
Picture
*******************
(p89 f2) 猪生长素与?谷氨酸
色谱柱：BisSep-SEC-S3000
规格：300×7.8mm
流动相：20mM磷酸盐缓冲液 pH7.0
流速：1.0mL/min
检测：紫外@220nm
温度：室温
样品：1. 共轭体
2. 猪生长素
3. 活性?谷氨酸
Picture
*******************
(p89 f3) 人体血清蛋白
色谱柱：BioSep-SEC-S3000
规格：300×7.8mm
流动相：10mM磷酸二氢钠缓冲液 pH7.2
流速：1.0mL/min
检测：紫外@215nm
进样量：10?L 0.5mg/mL人体血清蛋白
样品：1. 共聚体
2. 清蛋白
Picture
(p89 f4) 去活条件下的蛋白质分析
色谱柱：BioSep-SEC-S3000
规格：300×7.8mm
流动相：20mM磷酸盐缓冲液 pH6.5 with 6M 盐酸胍
流速：1.0mL/min
检测：紫外@280nm
进样量：20µL
样品：1. 磷酸化酶
2. 牛血清蛋白
3. 卵白蛋白
4. 脱水酶
5. 胰蛋白酶抑制剂
6. 溶菌酶
7. 2-巯基乙醇
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(p89 f5) 聚天冬氨酸标准品
色谱柱：BioSep-SEC-S2000
规格：300×7.8mm
流动相：0.2M乙酸盐/0.05M 三乙酸盐 pH 7.5
流速：1.0mL/min
检测：紫外@254nm
温度：室温
样品：1. 聚天冬氨酸-45（10.4）
2. 聚天冬氨酸-25（11.5）
3. 聚天冬氨酸-15（10.9）
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(p89 f6) 蛋白质标准品
色谱柱：BioSep-SEC-S3000
规格：300×7.8mm
流动相：50mM磷酸盐溶液 pH 6.8
流速：1.0mL/min
检测：紫外@280nm
温度：35℃
进样量：20?L
样品：Bio-Rad®蛋白质标准品
1. 高分子量聚合物
2. 甲状腺球蛋白
3. 免疫球蛋白A
4. 免疫球蛋白G
5. 牛血清白蛋白
6. 肌红蛋白
7. VB12
(P91)
BioSepTM-DEAE-P
2
通用型弱阴离子交换柱；
2
惰性聚合物填料，高样品回收率；
2
优异的温度和化学稳定性；
2
PH值稳定性，有利于柱清洗和延长柱寿命；
2
适用于快速分析
技术参数
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粒径
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7u
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|
PH值范围
|
2 to 12
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最大压力
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285 psi
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|
温度
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10℃ 到 50℃
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有机溶剂
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不超过20%
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柱含量
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0.6 meq/g
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最大键载量
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10-15%
|
|
最大盐浓度
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1M
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BioSep-DEAE-P是二乙胺乙基类的弱阴离子交换柱，非常适用于蛋白质、多肽和其它生物分子的分离。其疏水性大孔径的聚合物基球对于生物分离有很好的回收率和快速的分析效率。
(p91 f1) 对蛋白质分离实验
色谱柱：BioSep-DEAE-P
规格：75×7.8mm
流动相：A. 25mM Tris-HCl pH 8.5
B. 25mM Tris-HCl pH 8.5 混合500mM NaCl
梯度条件：0~5min 执行100% A
100%A 20min 内线性变化为 100%B
流速：1.0mL/min
检测：紫外@220nm
进样量：10µL
样品：以1mL A流动相为溶剂，下列组分各溶解5mg
1. 肌红蛋白
2. 铁传质蛋白
3. 卵白蛋白
4. 胰蛋白抑制剂
BioSep-SEC-S技术数据及明细
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BioSep-SEC-S2000
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BioSep-SEC-S3000
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BioSep-SEC-S4000
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填料
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硅胶基体键合亲水性功能团
|
硅胶基体键合亲水性功能团
|
硅胶基体键合亲水性功能团
|
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粒径（u）
|
5
|
5
|
5
|
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孔径（A）
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145
|
290
|
500
|
|
蛋白质排阻范围（Daltons）维持活性条件
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1,000-300,000
|
5,000-700,000
|
15,000-2,000,000
|
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0.5%十二烷基磺酸钠变性剂
条件下蛋白质排阻范围（Daltons）
|
200-75,000
|
5,000-100,000
|
15,000-500,000
|
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6M盐酸胍变性剂条件下蛋白质排阻范围（Daltons）
|
500-100,000
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1,000-150,000
|
5,000-700,000
|
|
PH值使用范围
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2.5-7.5
|
2.5-7.5
|
2.5-7.5
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(300×7.8mm柱型，1,0ml/min)特征柱压
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450psi
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350psi
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300psi
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最大使用柱压
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1000psi
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1000psi
|
1000psi
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柱效〔300×7.8柱型〕,最低塔板数（尿苷混合水作为流动相）
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70,000
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65,000
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60,000
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最大使用流速
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流速的调整限制在其产生的柱压不超过1000psi，调节过程中避免压力的骤然变化。
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柱体
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普通柱体：ss316不锈钢柱管，2u不锈钢筛板；生化兼容柱体：PEEK柱管，3u PEEK筛板。 | |
