分光光度计是根据物质对光的选择性吸收来测量微量物质浓度的仪器.
优点是灵敏度、准确度都较高,操作方便、快速.
 光的吸收定律（朗伯-比尔定律）
一束单色光(强度为I₀)通过某吸光物质的溶液时,其光能量的被吸收与该物质浓度的关系符合朗伯—比尔定律

即当入射光波长、温度和溶液的厚度一定时，吸光度与溶液的浓度成正比。

用公式表示为：T = I／I₀

 则 A = lg（1／T） =Kbc
式中 T — 透光率
     I — 透过光强度
     I₀ — 入射光强度
     A — 吸光度
     K — 比例常数
     b — 溶液的厚度
     c — 溶液的浓度

不同型号的分光光度计其外型、内部结构和性能各有区别，但都是依据以上原理设计制造的。
工作过程描述
光源1 发出白光经过进光狭缝、反射镜和透镜后,成为平行光进入三棱镜2 得到各种波长的单色光

混合单色光通过镀铝反射镜、透镜(连接波长调节器3),经过波长调节器调节得到所需波长的单色光

单色光通过盛有待测溶液的比色皿4 后,经过一个光量调节器5 入射到光电池6 上,可在检流计7 上
直接读出吸光度A。

721型分光光度计使用方法

用721型分光光度计测Cu(NH3)42+溶液的最大吸收光波长---主要步骤
	1，在仪器通电前，先检查电表的指针，必须位于“0”刻线上。电表上有可供调节的校正螺丝。
	2, 接通电源，打开比色皿暗箱盖，将参比溶液（蒸馏水）装入2厘米的比色 皿中后放入比色皿暗盒中，先选择? = 420nm，灵敏度置于“1”档，调节“ 0”透光率旋钮，使电表指“0”，然后将比色皿暗箱盖上，使参比溶液处于 光路位置。调节“100%”透光率旋钮，使电表指向透光率100%附近。仪器预 热约20分钟。
	3, 预热后将Cu(NH3)42+溶液装入2cm比色皿内，放进比色皿 架中，连续几次调整“0”和“100%”透光率直至稳定。注意调“0”时打开暗箱盖，调“100%”时合上暗箱盖。我们可看到在电表的读数盘上有一条弧形的镜面，当我们的视线、指针和被读数成一直线时，指针在镜面中的像是看不见的，所以在调“0”，“100%”和以后测吸光度读数时，我们不应看到镜面中指针的“像”。
	4, 拉动比色皿架拉杆，使Cu(NH3)42+溶液处于光路中，在420nm～800nm范 围内每隔10 nm测一次吸光度。在最大吸收峰附近每隔5nm测一次吸光度。注 意每选定一个入射光波长都要用参比溶液调一次100%透光率，且不时检查一 下“0”透光率。记录数据。测量得 Cu(NH3)42+ ? ～A 关系表。
	5, 测完以后，在坐标纸上以波长?为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制A与?关 系的吸收曲线，并标出最大吸收峰的?值。

1，六个Cu(NH3)42+标准溶液，其浓度分别为： 6.40×10-4 mol·L-1 1.28×10-3 mol·L-1 1.92×10-3 mol·L-1 2.56×10-3 mol·L-1 3.20×10-3 mol·L-1 3.84×10-3 mol·L-1

2, 选择波长为? = 620 nm（以上述实验为依据），仍以蒸馏水为参比溶液，按浓度由小到大的顺序将标准溶液装入洁净的2cm的比色皿中（注意用溶液润洗比色皿，用镜头纸吸干外面的液体），将参比溶液置于光路中，检查调整0透光率和100%透光率。

3, 检查调整透光率后，拉动比色皿架拉杆，依次将标准溶液拉入光路中，记下相应A值。 4, 取出已测的三个装标准溶液的比色皿，倒掉溶液，再依次装入剩余的三个标准溶液（直接用溶液润洗而不需先用水洗）。测出其A值（作记录）。六个标准溶液的A值依次为：0.070, 0.150, 0.216, 0.279, 0.348, 0.426 5, 测出样品的吸光度（作记录）。样品的吸光度为0.176。

6, 测试完毕后，关闭电源，将比色皿取出洗净，用擦镜纸吸干，放入盒中。给分光光度计盖上罩布

7, 根据Cu(NH3)42+浓度与吸光度的关系在坐标纸上以Cu(NH3)42+浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制工作曲线。 8, 利用样品的吸光度，在工作曲线上求得相应的浓度为xmol·L-1。